鼠痘病毒環介導等溫擴增可視化檢測方法的建立
摘要：目的應用環介導等溫擴增（LAMP）技術建立一種鼠痘病毒（ECTV）的可視化快速檢測方法。方法通過序列分析選擇3段ECTV序列保守區域設計了9套LAMP引物,利用LAMP Real Time Turbidimeter LA-320C儀監測反應進程并篩選最佳引物組合,優化反應條件,建立了對ECTV核酸進行特異性擴增的LAMP檢測方法,并可通過加入目測熒光檢測試劑肉眼判斷結果。對所建立的方法進行了敏感性、特異性評估,并對人工感染樣品進行了檢測。結果該方法在63℃恒溫下作用60 min,ECTV DNA獲得了高效特異性擴增,與其余常見小鼠病毒無交叉反應;最低檢出量為530 fg/μL,是常規PCR的10~3倍,加入目測熒光染料判斷結果與Real Time Turbidimeter LA-320儀監測結果一致。結論建立的ECTV LAMP檢測方法具有快速、特異、靈敏和操作簡單的特點,或具有良好應用前景。
注: 保護知識產權,如需閱讀全文請聯系實驗動物與比較醫學雜志社
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