鼠痘病毒環(huán)介導(dǎo)等溫擴增可視化檢測方法的建立
摘要：目的應(yīng)用環(huán)介導(dǎo)等溫擴增（LAMP）技術(shù)建立一種鼠痘病毒（ECTV）的可視化快速檢測方法。方法通過序列分析選擇3段ECTV序列保守區(qū)域設(shè)計了9套LAMP引物,利用LAMP Real Time Turbidimeter LA-320C儀監(jiān)測反應(yīng)進程并篩選最佳引物組合,優(yōu)化反應(yīng)條件,建立了對ECTV核酸進行特異性擴增的LAMP檢測方法,并可通過加入目測熒光檢測試劑肉眼判斷結(jié)果。對所建立的方法進行了敏感性、特異性評估,并對人工感染樣品進行了檢測。結(jié)果該方法在63℃恒溫下作用60 min,ECTV DNA獲得了高效特異性擴增,與其余常見小鼠病毒無交叉反應(yīng);最低檢出量為530 fg/μL,是常規(guī)PCR的10~3倍,加入目測熒光染料判斷結(jié)果與Real Time Turbidimeter LA-320儀監(jiān)測結(jié)果一致。結(jié)論建立的ECTV LAMP檢測方法具有快速、特異、靈敏和操作簡單的特點,或具有良好應(yīng)用前景。
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