弓形蟲生物檢測靶標miR-191的鑒定
摘要:目的建立弓形蟲miRNA探針定量檢測法。方法采用高通量測序技術篩選出不同弓形蟲蟲株間表達量高且差異不明顯潛在靶標,并對其不同時間點(0 d、1 d、3 d、5 d、7 d)外周血的表達及診斷效能進行研究。結果高通量測序表明, miR-252、miR-3641、miR-509-5p、miR-1285、miR-140、miR128-1、miR-191、miR-3426具有作為血液中弓形蟲生物檢測靶標的潛在性。通過對感染弓形蟲RH株和M49株小鼠的miR-191診斷效能分析后表明,敏感性分別為85%和95%,特異性均為100%。根據miR-191制備納米金探針,對不同時間點感染弓形蟲RH株和ME49株大鼠的血液靶標miR-191進行定量分析表明,感染后7 d內感染弓形蟲miR-191表達情況相對穩定。制作弓形蟲RH株、弓形蟲ME49株、伯氏瘧原蟲、約氏瘧原蟲、隱孢子蟲,鼠肝炎病毒和金黃色葡萄球菌感染的小鼠模型,與對照組比較分析表明,miR-191在感染弓形蟲RH株和ME49株的小鼠模型中出現高表達,而在感染細菌、病毒和其它寄生蟲的小鼠模型中均未出現表達。結論弓形蟲miR-191具有作為檢測靶標的應用價值。
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