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利用流式分選技術(shù)富集空載質(zhì)粒轉(zhuǎn)染特定巨噬細胞的方法及條件優(yōu)化

吳昊; 王敏; 羅賢強; 郭建春; 鄭斌嬌 溫州醫(yī)科大學(xué)浙江省醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)重點實驗室; 浙江溫州325035; 溫州醫(yī)科大學(xué)Attardi線粒體生物醫(yī)學(xué)研究院

摘要：目的:建立BD FACSAria II流式細胞分選儀富集PX458 空載質(zhì)粒轉(zhuǎn)染J774A.1 細胞的方法并進行技術(shù)優(yōu)化,確立用于篩選J774A.1細胞的最佳條件。方法:構(gòu)建PX458空載質(zhì)粒轉(zhuǎn)染J774A.1細胞株,進行7-AAD染色。選擇BD FACSAria II流式細胞分選儀的100 μm噴嘴以及initial、4-way purity、purity、yield、fine tune、single cell 6種分選模式分選J774A.1細胞的GFP陽性轉(zhuǎn)染株,比較儀器各部分參數(shù)變化對分選效率的影響。結(jié)果:在儀器穩(wěn)定的液流條件下,100 μm噴嘴各分選模式所得細胞純度均達80%以上,其中purity模式分選效率最高,達95.7%±1.0%。結(jié)論:使用BD FACSAria II流式細胞分選儀100 μm噴嘴分選PX458空載轉(zhuǎn)染的J774A.1細胞選擇purity分選模式最合適。

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