腺苷A2B受體活化對TNF-α致人肺微血管內皮細胞炎性損傷的影響
摘要：目的探討腺苷A2B受體（A2BR）在腫瘤壞死因子-α（TNF-α）誘導肺微血管內皮炎性損傷中的作用及機制。方法體外培養人肺微血管內皮細胞（HPMECs），分別進行TNF-α劑量-時效實驗和A2BR靶向激動劑／抑制劑干預實驗。①劑量一時效實驗：先將細胞分為5組，分別加入終濃度為0（空白對照）、20、50、100、150μg/L的TNF-α孵育24h，選最佳刺激濃度；另取細胞分為6組，以終濃度100μg／LTNF—α分別培養HPMECs0、4、8、12、24、36h，確定最佳作用時間。檢測各組細胞A2BmRNA和蛋白表達情況。②A2BR的靶向激動劑／抑制劑干預實驗：將細胞分為1μmol／LA2BR靶向激動劑BAY60—6583＋100LTNF—α組（B＋T組）、μmol／LA2BR靶向抑制劑PSBlll5＋100刪LTNF-α組（P＋T組）和TNF-α、BAY60—6583、PSBlll5單獨刺激組以及空白對照組。檢測各組細胞活性、細胞周期以及血管內皮細胞黏附分子-1（VCAM-1）、白細胞介素-1p（IL-1p）的蛋白表達水平。結果①劑量一時效實驗：將空白對照組的值設為1，隨著TNF—α濃度的升高，A2BRmRNA（2^-△△Ct）及蛋白（灰度值）表達水平逐漸增加，以100μg／LTNF—α作用后A2BRmRNA及蛋白表達水平升高最為顯著（分別為7．95±0．78和1．84±0．16）；用100μg／LTNF—d作用HPMECs不同時間后，隨處理時間延長A2BR的mRNA（2?！鱝ct）和蛋白（灰度值）表達水平均逐漸增加，以作用24h升高最顯著（分別為7．93±1．39和1．76±0．07）。②A2BR特異性激動劑／抑制劑干預實驗：與空白對照組比較，TNF-α組細胞活性明顯降低[（89．28±2．21）％比100％]，進入G1期的細胞數明顯增多[（62．21±1．11）％比（34．40±0．47）％]，進入S＋G2期的細胞數明顯減少[（37．79±1．11）％比（65．60±0．47）％]，VCAM-1和IL-1B蛋白表達明顯增加[VCAM-1（灰度值）：12．94±1．18比1；IL-1B（灰度值）：3．03±0．23比1，?
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