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摘要：目的通過反向遺傳學(xué)技術(shù),構(gòu)建乙型腦炎病毒減毒疫苗株SA14-14-2囊膜蛋白（envelope protein,E蛋白）第264位氨基酸的回復(fù)突變株,并分析該位點(diǎn)突變對疫苗株小鼠毒力的影響。方法通過融合PCR擴(kuò)增含基因組第1 769核苷酸位點(diǎn)回復(fù)突變的基因片段（T→G）,替換SA14-14-2相應(yīng)區(qū)域,使得編碼E264位點(diǎn)的氨基酸位點(diǎn)由SA14-14-2的組氨酸（H）回復(fù)突變成強(qiáng)毒株SA14的谷氨酰胺（Q）,將該回復(fù)突變株命名為r JEV264（H→Q）,通過測定蝕斑大小和一步生長曲線,分析r JEV264的增殖特征;通過測定該突變株的昆明種小鼠腦內(nèi)神經(jīng)毒力、皮下感染入腦能力、腹腔感染入腦能力,分析E264位點(diǎn)回復(fù)突變后對小鼠毒力的影響。結(jié)果成功構(gòu)建了回復(fù)突變株r JEV264,該突變株蝕斑大小與SA14-14-2相似,在PHK細(xì)胞上的增殖特征與SA14-14-2沒有明顯差異。r JEV264對小鼠有可檢測的腦內(nèi)神經(jīng)毒力,毒力為5.51 lg PFU/LD50,但無論是皮下注射還是腹腔注射,都沒有使小鼠發(fā)病。結(jié)論在分子水平證明了E264位點(diǎn)是影響乙腦減毒活疫苗安全性的關(guān)鍵位點(diǎn)之一,E264位點(diǎn)的回復(fù)突變增強(qiáng)了SA14-14-2的小鼠腦內(nèi)神經(jīng)毒力,但沒有增強(qiáng)小鼠神經(jīng)侵襲力。

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