Ⅱ型登革病毒NS1蛋白的表達及其免疫血清的制備
摘要：目的原核表達、純化II型登革病毒NS1A蛋白（NS1蛋白1～180氨基酸即DENV2 NS1A）,將其免疫動物制備免疫血清并鑒定。方法構建重組融合質粒p ET22b-p64K-L-DENV2 NS1A,轉化至大腸桿菌BL21（DE3）中,IPTG低溫誘導表達。表達的融合蛋白經Hitrap Talon crude柱親和層析純化后,免疫雌性日本長耳兔獲得抗DENV2 NS1A兔抗血清,用Western blot和免疫熒光檢測免疫血清對重組麻疹病毒MV（S191）-DENV2 NS1 6Xhis的識別和結合特性。結果重組融合質粒p ET22b-p64K-L-DENV2 NS1A經雙酶切和測序證明構建正確。表達的重組融合蛋白相對分子質量為100 000,純化后蛋白純度在85%以上,免疫獲得的抗DENV2 NS1A兔抗血清可識別重組病毒MV（S191）-DENV2 NS1 6XHis表達的DENV2 NS1蛋白。結論原核表達并純化了DENV2 NS1A蛋白,建立了基于NS1蛋白的重組病毒MV（S191）-DENV2 NS1 6XHis的Western blot和免疫熒光檢測方法,為登革熱疫苗研制中重組病毒MV（S191）-DENV2 NS1 6XHis的質檢奠定了基礎。
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