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實時逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測G1、G2和G4型輪狀病毒方法的建立

王云瑾; 王名強(qiáng); 傅生芳; 周旭; 白慕群; 胡廣宏; 寇桂英; 包紅; 陳玥如; 馬超 蘭州生物制品研究所有限責(zé)任公司第二研究室甘肅省疫苗工程技術(shù)研究中心; 甘肅蘭州730046; 上海生物制品研究所有限責(zé)任公司; 上海200052

摘要：目的建立3種用于檢測G1、G2和G4型輪狀病毒VP7基因的一步法實時逆轉(zhuǎn)錄PCR,用于本實驗室G1、G2和G4型輪狀病毒的快速檢測和定量、定性分析。方法設(shè)計G1、G2和G4型輪狀病毒VP7基因特異性引物和探針,采用G1、G2和G4型輪狀病毒特異性體外轉(zhuǎn)錄RNAs,建立實時逆轉(zhuǎn)錄PCR,特異性檢測G1、G2和G4型輪狀病毒VP7基因方法。結(jié)果 3種實時逆轉(zhuǎn)錄PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線R~2均大于0.99,擴(kuò)增效率均在90%～110%之間。不同濃度體外轉(zhuǎn)錄RNAs重復(fù)性檢測結(jié)果 CV均〈5%,且可以對單拷貝RNAs樣本進(jìn)行檢測。結(jié)論本檢測方法快速、靈敏且重復(fù)性好,可以對輪狀病毒VP7基因進(jìn)行特異而有效的檢測,為實驗室輪狀病毒毒株的分型和定量檢測提供了特異而有效的檢測方法,也為今后多重實時逆轉(zhuǎn)錄PCR的建立奠定了試驗基礎(chǔ)。

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