實時逆轉錄PCR檢測G1、G2和G4型輪狀病毒方法的建立
摘要：目的建立3種用于檢測G1、G2和G4型輪狀病毒VP7基因的一步法實時逆轉錄PCR,用于本實驗室G1、G2和G4型輪狀病毒的快速檢測和定量、定性分析。方法設計G1、G2和G4型輪狀病毒VP7基因特異性引物和探針,采用G1、G2和G4型輪狀病毒特異性體外轉錄RNAs,建立實時逆轉錄PCR,特異性檢測G1、G2和G4型輪狀病毒VP7基因方法。結果 3種實時逆轉錄PCR標準曲線R~2均大于0.99,擴增效率均在90%～110%之間。不同濃度體外轉錄RNAs重復性檢測結果 CV均〈5%,且可以對單拷貝RNAs樣本進行檢測。結論本檢測方法快速、靈敏且重復性好,可以對輪狀病毒VP7基因進行特異而有效的檢測,為實驗室輪狀病毒毒株的分型和定量檢測提供了特異而有效的檢測方法,也為今后多重實時逆轉錄PCR的建立奠定了試驗基礎。
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