百日咳鮑特菌脂寡糖的制備及寡糖結合物在小鼠體內免疫原性研究
摘要：目的提取純化百日咳鮑特菌（簡稱百日咳桿菌）脂寡糖（lipo-oligosaccharides,LOS）,制備百日咳桿菌多糖蛋白結合物,并分析其理化性質及免疫原性。方法通過改良熱酚水法提取百日咳桿菌的LOS,采用酶解法純化LOS,通過1%冰醋酸水解獲得寡糖（oligosaccharides,OS）,產物經Tricine-SDS-PAGE及核磁共振氫譜（^1H NMR）鑒定。OS的羥基經1-氰基-4-二甲氨基吡啶四氟硼酸酯（1-cyano-4-dimethylamino pyridinium tetrafluoroborate,CDAP）活化后,與破傷風類毒素己二酸酰肼衍生物（TTAH））共價結合,制備多糖蛋白結合物,經Sephacryl S-300層析柱純化后收集結合物原液,并對結合物的理化性質、抗原性進行分析,采用兩種劑量（2.5μg/劑和5.0μg/劑）免疫BALB/c小鼠,分析其免疫原性。結果純化后LOS純度〉90%,核磁共振結果表明OS結構正確,功能基團得到保留。制備的結合物抗原性未發生改變,經3針免疫后,兩種劑量下結合物均有劑次加強效應（P〈0.05）,且兩者差異無統計學意義（P〉0.05）。結論將百日咳桿菌OS與TTAH結合是制備百日咳桿菌多糖蛋白結合疫苗的可行途徑,并且結合物在小鼠體內具有良好的免疫應答。
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