一種改良大鼠海馬神經元原代培養的方法
摘要：目的為缺血性腦損傷模型的制備及研究建立一種更好的體外培養海馬神經元的方法。方法實驗組取出生24h內的Wistar新生鼠海馬,用木瓜酶和DNA酶消化,以1×108/L的密度接種于含體積分數0.20胎牛血清的DMEM-F12培養液中,24h后更換無血清培養液,每隔3d半量換液。對照組采用傳統的培養方法培養細胞。培養期間用倒置顯微鏡觀察細胞形態及數量變化。采用免疫熒光法測定神經元特異性烯醇化酶表達,判斷海馬神經元培養是否成功。結果實驗組的海馬神經元培養12h,可見大部分細胞貼壁;培養24h,大部分細胞可見3-4個突起,突起長度為（25.0±2.5）μm;培養3d,神經元胞體增大,可見明顯光暈;之后神經元分化逐漸成熟,胞體透亮,呈錐形或多極形,光暈明顯,神經元之間的突起聯系更加緊密,形成密集的神經細胞網絡;培養13d后,神經元細胞開始退化、變性,胞體萎縮,神經細胞網絡開始老化。隨著培養天數的增加,神經元可出現少量凋亡,但實驗組培養1、3、5、8d時的神經元數量明顯高于對照組（t=11.5-49.5,P〈0.05）。免疫熒光法鑒定顯示,實驗組神經元細胞陽性率為（93.53±1.67）%。結論用上述改良方法培養得到的海馬神經元細胞生長狀態良好,可用于后續實驗研究。
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