大鼠脊髓損傷早期CNTF與NT-4表達(dá)變化及其相互關(guān)系
摘要:目的 探討內(nèi)源性睫狀細(xì)胞神經(jīng)生長因子(ciliary neurotrophic factor, CNTF)和神經(jīng)營養(yǎng)因子4(neurotrophin-4, NT-4)在大鼠脊髓損傷(spinal cord injury, SCI)早期的表達(dá)變化及其相互關(guān)系,為SCI神經(jīng)營養(yǎng)因子療法提供理論依據(jù)。 方法 成年Sprague Dawley(SD)大鼠45只隨機(jī)分為假手術(shù)(Sham)組、SCI-12h、SCI-1d、SCI-3d和SCI-7d組( n =9)。各SCI組大鼠均采用改良Allen's法制備T10節(jié)段脊髓頓挫傷模型,用BBB(Basso-Beattie-Bresnahan locomotor, BBB)評分法評估各組大鼠后肢運(yùn)動功能;采用熒光定量PCR(Q-PCR)及免疫組織化學(xué)染色檢測大鼠脊髓頓挫傷后CNTF與NT-4的表達(dá)情況;利用GeneMANIA數(shù)據(jù)庫對CNTF與NT-4的相互作用進(jìn)行預(yù)測分析。 結(jié)果 術(shù)后Sham組大鼠BBB評分不變,SCI組大鼠損傷平面以下完全癱瘓,BBB評分為0,SCI-7d組評分較SCI-12h組高( P <0.01),但仍低于Sham組( P <0.01)。與Sham組相比,SCI-12h組CNTF mRNA相對表達(dá)量降低( P <0.05),于SCI-3d組降至最低( P <0.05);NT-4 mRNA相對表達(dá)量在SCI-12h組無變化,于SCI-1d組表達(dá)增高( P <0.05),至SCI-7d組表達(dá)降低( P <0.01),但與Sham組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P >0.05)。免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示,CNTF在神經(jīng)元與神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞均有表達(dá),NT-4主要在神經(jīng)元表達(dá)。與Sham組相比,CNTF 與NT-4陽性神經(jīng)元數(shù)量及IOD值均在SCI-12h組減少( P <0.01);兩種蛋白質(zhì)隨后呈現(xiàn)不同的變化趨勢:脊髓前角CNTF陽性神經(jīng)元數(shù)量與IOD值分別在SCI-3d組與SCI-7d組再次降低( P <0.01);而NT-4陽性神經(jīng)元與IOD值分別在SCI-7d組與SCI-3d組增高,表達(dá)水平接近Sham組。脊髓后角CNTF陽性神經(jīng)元數(shù)量在SCI-1d組再次降低( P <0.01),至SCI-7d組無變化;NT-4陽性神經(jīng)元數(shù)量及其IOD值分別在SCI-1d組及SCI-7d組增高( P <0.01),且SCI-7d組與Sham組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P >0.05)。
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