PERK-ATF4-CHOP信號(hào)通路在褪黑素抵抗血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)乳鼠心肌細(xì)胞肥厚中的作用
摘要:目的 初步探討內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激PERK-ATF4-CHOP通路在褪黑素抵抗血管緊張素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥厚中的作用。方法 將培養(yǎng)的心肌細(xì)胞隨機(jī)分為對(duì)照組、AngⅡ處理組、褪黑素組。采用乳酸脫氫酶 (lactate dehydrogenase,LDH)法檢測(cè)細(xì)胞活性,原位切口末端標(biāo)記法(TUNEL)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率,Western blot檢測(cè)蛋白激酶R樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶(protein kinase r-like endoplasmic reticulum kinase,PERK)、活性轉(zhuǎn)錄因子(Activating Transcription Factor,ATF)4、C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)的表達(dá)水平,實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)檢測(cè)心肌肥厚相關(guān)標(biāo)識(shí)物心房鈉尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)、腦鈉尿肽(brain natriuretic peptide,BNP)和心肌β-肌球蛋白重鏈(β-myosin heavy chain beta,β-MHC) mRNA表達(dá)量的變化;免疫熒光檢測(cè)心肌細(xì)胞橫截面積。結(jié)果 與對(duì)照組相比,AngⅡ能夠刺激心肌細(xì)胞上調(diào)ANP、BNP和β-MHC表達(dá)(P〈0.05),刺激LDH釋放(P〈0.05)、增加細(xì)胞凋亡比率和心肌細(xì)胞橫截面積(P〈0.05);與AngⅡ組相比,褪黑素可以濃度依賴(lài)性顯著抑制AngⅡ誘導(dǎo)的ANP、BNP和β-MHC的上調(diào)和LDH的積累,抑制心肌細(xì)胞的橫截面積增加,降低細(xì)胞凋亡,并抑制誘導(dǎo)的PERK-ATF4-CHOP通路的激活(P〈0.05);與對(duì)照組相比,AngⅡ顯著增加PERK、ATF4和CHOP的表達(dá)水平(P〈0.05),但給予褪黑素后,激活的PERK-ATF4-CHOP則被明顯抑制(P〈0.05)。結(jié)論 褪黑素可能通過(guò)抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激PERK-ATF4-CHOP信號(hào)通路激活,改善AngⅡ誘導(dǎo)的乳鼠心肌細(xì)胞肥厚,為未來(lái)褪黑素的進(jìn)一步臨床研究拓展新思路。
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