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Methanopyrus sp. SNP6源黃素腺嘌呤二核苷酸合成酶序列分析及在大腸桿菌中的異源表達(dá)

潘俏俏; 裘娟萍; 余志良 浙江工業(yè)大學(xué)生物工程學(xué)院; 浙江杭州310040

摘要：Methanopyrus sp.SNP6是一株極端嗜熱產(chǎn)甲烷菌,本文將其黃素腺嘌呤二核苷酸合成酶基因（fads）進(jìn)行生物信息學(xué)分析并在大腸桿菌中加以表達(dá)。生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn),FAD合成酶由150個氨基酸殘基組成,理論分子量為17 049.93,等電點(diǎn)為8.95;三級結(jié)構(gòu)為同源二聚體,每個單體含有五股平行的（折疊,比典型的核苷酸結(jié)合折疊少一個β折疊。擴(kuò)增fads基因,構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒p ET28b（＋）-fads,在大腸桿菌BL21（DE3）中誘導(dǎo)表達(dá)。實(shí)驗結(jié)果顯示,該FAD合成酶能在大腸桿菌中高效表達(dá),但部分蛋白以包涵體形式存在。本研究對Methanopyrus sp.SNP6源FAD合成酶進(jìn)行了蛋白質(zhì)序列和結(jié)構(gòu)的分析,并首次實(shí)現(xiàn)了其在大腸桿菌中的穩(wěn)定高效表達(dá),為后續(xù)該酶的研究和開發(fā)提供了基礎(chǔ)。

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