亞甲基四氫葉酸還原酶基因多態性熒光PCR檢測方法的建立與應用
摘要：目的建立檢測人亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)基因多態性熒光PCR的檢測方法。方法用Primer Premier 5.0和Primer Express 3.0軟件針對人MTHFR基因677多態性位點分別設計1對引物和2條TaqMan-MGB探針,通過GenBank在線比對分析評估引物的特異性,優化建立熒光PCR反應體系。以2個檢測通道的循環閾值(Ct值)差值判斷檢測位點的基因型。評價該方法的最低檢測限、準確度和精密度。用該方法檢測300例臨床樣本,用核酸序列測定法對準確度進行評價。結果建立的熒光PCR法對MTHFR 677位點檢測具有較高的準確度,最低檢測限到達2 ng/反應。300例臨床樣本的檢測結果與測序法的檢測結果的一致性為100%。結論建立的MTHFR基因多態熒光PCR檢測方法具有很好的準確度和精密度,適用于臨床精準預測腦卒中發生風險和預后及指導孕婦個體化補充葉酸。
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