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摘要：[目的]了解馬尾松干旱脅迫轉(zhuǎn)錄組序列的功能分布和SSR位點(diǎn)分布特征,并探索與干旱關(guān)聯(lián)的SSR位點(diǎn)。[方法]對(duì)馬尾松幼苗進(jìn)行持續(xù)干旱脅迫,選取干旱10、15、25 d及正常供水對(duì)照的馬尾松針葉樣品,通過總RNA提取、Illumina測(cè)序、raw reads去冗、Trinity拼接獲得unigenes。利用Blast比對(duì),對(duì)Unigene序列進(jìn)行GO、KOG、KEGG功能注釋及分類;利用Misa軟件進(jìn)行SSR位點(diǎn)批量搜尋,primer 3. 0軟件進(jìn)行規(guī)?；疭SR引物設(shè)計(jì);利用GOSeq（1. 10. 0）、KOBAS（v2. 0. 12）軟件對(duì)差異表達(dá)的含SSR位點(diǎn)Unigene進(jìn)行GO、KEGG顯著性富集分析。[結(jié)果]馬尾松轉(zhuǎn)錄組194 821個(gè)Unigene中,101 806個(gè)Unigene獲得注釋,包含64 943個(gè)GO功能注釋、35 880個(gè)KOG功能注釋及30 882個(gè)KEGG注釋。搜尋到6 728個(gè)SSR位點(diǎn),分布于6 367個(gè)Unigene中,SSR出現(xiàn)頻率為3. 45%;重復(fù)類型以單、三、二核苷酸為主,分別占總SSR的35. 82%、33. 03%和25. 22%;重復(fù)基序以A/T、AT/AT、AG/CT、AGC/CTG、AAG/CTT為主;基序長(zhǎng)度以10 20 bp的短序列SSR為主;基序重復(fù)次數(shù)以5～10次重復(fù)占優(yōu)勢(shì);批量設(shè)計(jì)13 338對(duì)SSR引物。422個(gè)含SSR位點(diǎn)Unigene具有差異表達(dá); KEGG富集分析發(fā)現(xiàn),有11個(gè)含SSR位點(diǎn)的差異Unigene參與了光合作用、植物激素信號(hào)傳導(dǎo)及類胡蘿卜素合成等3個(gè)與干旱響應(yīng)相關(guān)的代謝途徑。[結(jié)論]從較高質(zhì)量的馬尾松轉(zhuǎn)錄組中獲得101 806個(gè)具有注釋的Unigene;從6 367個(gè)Unigene中挖掘出6 728個(gè)SSR位點(diǎn); 422個(gè)含SSR位點(diǎn)的差異表達(dá)Unigene中篩選出11個(gè)與干旱關(guān)聯(lián)的SSR功能位點(diǎn),為抗旱功能基因定位及馬尾松抗旱分子機(jī)制研究奠定基礎(chǔ)。

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