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基于日本血吸蟲SEA納米抗體的膠體金免疫層析技術的初步研究

丁豪杰; 丁建祖; 孔慶明; 鄭斌; 樓滌; 陳睿; 陸紹紅 浙江省醫學科學院寄生蟲病研究所; 杭州310013

摘要:為建立基于納米抗體的檢測日本血吸蟲感染的膠體金免疫層析技術,將已經通過噬菌體文庫篩選得到的兩株納米抗體的質粒,在枯草芽孢桿菌中表達,得到具有活性的抗體蛋白(VHH-48、VHH-52)并以NI-NTA親合層析純化。以檸檬酸三鈉還原法制備膠體金溶液,標記VHH-48和VHH-52抗體蛋白并制備金標墊,分別用日本血吸蟲可溶性蟲卵抗原(SEA)和羊抗鼠IgG作為檢測線和質控線,確定抗體蛋白的最佳標記pH和最適蛋白濃度。采用抗體雙夾心的方法對兩株抗體蛋白進行組合,建立膠體金免疫層析方法。以優化的雙夾心抗體組合,組裝試紙條,進行了靈敏度的測定和血吸蟲病人糞檢陽性血清的敏感性評估,以并殖吸蟲等其他寄生蟲感染的血清測定了試紙條的特異性。結果顯示,成功表達并獲得了純度較高的納米抗體。膠體金標記VHH-48和VHH-52抗體的最適蛋白量為14和10μg/mL,最適pH分別需要加入16和12μL體積的0.2mol/LK2CO3,并確定以VHH-52標金和VHH52劃線為最佳的抗體雙夾心組合。對可溶性蟲卵抗原的最低檢測量為3.4ng/mL,檢測血吸蟲病人陽性血清的檢出率為2.27%,檢測其他寄生蟲感染血清結果顯示出良好的特異性。本文構建了基于日本血吸蟲SEA納米抗體的膠體金免疫層析試紙條方法,為納米抗體在血吸蟲病快速診斷的應用奠定了一定基礎。

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