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加急見刊

登革2型病毒E蛋白基因的酵母表達

劉美德; 冀霞; 余張; 楊正國; 羅森; 趙瑞君; 趙彤言 軍事科學(xué)院軍事醫(yī)學(xué)研究院微生物流行病研究所; 北京100071; 山西醫(yī)科大學(xué)病原生物學(xué)教研室; 太原030001; 貴陽醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)學(xué)院; 貴陽550004; 北京市疾病預(yù)防控制中心北京市預(yù)防醫(yī)學(xué)研究中心; 北京100013

摘要：為研究登革病毒與蚊蟲相互作用的分子機制，本研究對DENV-2的E蛋白基因進行了畢赤酵母分泌表達。首先，經(jīng)RT—PCR方法克隆DENV-2的E蛋白基因，將克隆的基因與表達載體pPICZaB連接以構(gòu)建表達重組子；并經(jīng)酶切、PCR、測序篩選實驗鑒定正確重組子。然后，重組子經(jīng)氯化鋰法轉(zhuǎn)化畢赤酵母菌KM71H獲得轉(zhuǎn)化子；經(jīng)抗生素、表型鑒定、PCR篩選得到Muts型的多拷貝轉(zhuǎn)化子。最后，經(jīng)甲醇誘導(dǎo)基因表達，Western—blotting方法鑒定蛋白表達情況及最佳表達時間。本研究對DENV-2的E蛋白成功進行了分泌表達，并且確定其表達最佳發(fā)酵時間為96h；為進一步研究登革病毒與蚊蟲相互作用的分子機制奠定了基礎(chǔ)。

注: 保護知識產(chǎn)權(quán),如需閱讀全文請聯(lián)系寄生蟲與醫(yī)學(xué)昆蟲學(xué)報雜志社