埃及伊蚊絲氨酸蛋白酶抑制劑23的基因克隆表達與多克隆抗體制備
摘要：埃及伊蚊serpin23（絲氨酸蛋白抑制劑23）在雌蚊唾液腺特異高表達，是蚊蟲唾液組分的主要蛋白之一。本文設計特異性引物序列，采用RT—PCR技術擴增獲得埃及伊蚊廣東電白株serpin23成熟肽序列，構建重組表達質粒pET-28a（＋）-serpin23并測序驗證。經IPTG誘導表達、KCl染色、切膠純化獲取了目的蛋白；制備了小鼠特異性抗serpin23蛋白多克隆抗體。結果顯示：獲得serpin23成熟肽序列，全長1197bp，編碼399個氨基酸。等電點pI為6．13，具有serpin結構域和一個功能未知的FAINT結構域。pET-28a（＋）-serpin23重組質?？杀磉_了大小約為47kDa、以包涵體表達為主的融合蛋白。Western Blot結果證明serpin23重組蛋白可以與抗-His標簽和抗-serpin23抗體發生免疫反應，約47kDa處產生特異性條帶。本研究成功獲得了埃及伊蚊廣東電白株serpin23重組表達蛋白和抗serpin23多克隆抗體，為后續功能研究奠定基礎。
注: 保護知識產權,如需閱讀全文請聯系寄生蟲與醫學昆蟲學報雜志社
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