人跨膜蛋白39A原核表達載體構建、條件優化及可溶性表達
摘要：目的構建人跨膜蛋白39A基因(TMEM39A)的原核表達載體,優化表達條件并獲得可溶性表達的TMEM39A。方法以HEK293細胞的總RNA為模板,反轉錄PCR擴增TMEM39A,構建其原核表達載體pGEX-6P-1-TMEM39A,并在不同溫度、IPTG濃度、A600nm值及時間條件進行誘導表達,然后利用上述獲得的最佳誘導條件進行大量表達,分析其可溶性和抗原性。結果重組表達載體pGEX-6P-1-TMEM39A與GenBank中的TMEM39A(登錄號:BC021277.2)的核苷酸序列同源性為99.9%,氨基酸序列同源性為100%。重組蛋白GST-TMEM39A在69和60 ku處出現兩條特異性條帶,采用單因素方法對不同溫度、IPTG濃度、A600nm值及時間進行分析得出GST-TMEM39A的最佳誘導條件為25℃、A600nm值為0.6~0.8、IPTG濃度為0.1 mmol/L誘導9 h;在此基礎上進行大量表達,并以可溶性形式獲得了TMEM39A與GST蛋白的融合表達。結論成功構建了TMEM39A的原核表達載體,確定了GST-TMEM39A的最佳表達條件并實現其的可溶性表達,為后續純化TMEM39A、制備抗體開展功能研究奠定物質基礎,并為深入探討TMEM39A與許多疾病或病毒的關系提供科學依據。
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