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惡性瘧原蟲自噬相關(guān)蛋白8基因原核重組表達及多克隆抗體制備

李縝; 鄒洋; 黃敏君; 賈永根; 閆愛霞; 李晶晶; 谷俊朝 首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京友誼醫(yī)院; 北京熱帶醫(yī)學(xué)研究所; 熱帶病防治研究北京市重點實驗室; 北京100050

摘要：目的通過pET-41 Ek/LIC載體在大腸桿菌工程菌中重組表達惡性瘧原蟲自噬相關(guān)蛋白8(PfAtg8)基因的重組蛋白GST-PfAtg8-6×His,并用蛋白免疫法制備小鼠抗自噬相關(guān)蛋白8(PfAtg8)的多克隆抗體,并驗證其效價。方法體外培養(yǎng)惡性瘧原蟲3D7株,并提取DNA,PCR擴增PfAtg8序列全長,與pET-41 Ek/LIC載體通過基因重組直接連接,在大腸桿菌Rosetta^TM(DE3)PLysS工程菌中誘導(dǎo)表達重組蛋白GST-PfAtg8-6×His,蛋白免疫法制備鼠抗PfAtg8的多克隆抗體并用Western blots和酶聯(lián)免疫吸附測定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)進行效價驗證。結(jié)果PCR擴增PfAtg8基因并插入pET-41 Ek/LIC載體,轉(zhuǎn)化入大腸桿菌。誘導(dǎo)表達并純化重組蛋白,進而利用該蛋白免疫小鼠制備多克隆抗體,經(jīng)驗證該抗體可對重組蛋白進行特異性識別,且效價可達1∶100000。結(jié)論成功表達、純化了GST-PfAtg8-6×His重組蛋白,并免疫小鼠獲得多克隆抗體血清。

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