MARCO基因敲除小鼠模型鑒定
摘要：目的通過基因分型、基因測序與蛋白免疫印跡法鑒定MARCO基因敲除小鼠模型。方法將經成簇的規律間隔短回文重復序列（CRISPR）/CRISPR相關蛋白9（Cas9）技術獲得16種堿基敲除的MARCO^-/-親代C57BL/6小鼠（雌、雄鼠各8只）與MARCO^＋/＋的親代C57BL/6雌性小鼠（8只）合籠繁殖,獲得子一代MARCO^0＋/-小鼠;再以MARCO^0＋/-小鼠自交得到MARCO^-/-足夠數量的純合小鼠。采用基因測序對小鼠基因型進行鑒定,采用蛋白免疫印跡法檢測MARCO蛋白相對表達水平。結果經過1年的合籠繁殖,共繁殖5代,有5種敲除不同堿基數（-11、-25、-36、-46、-61 bp）的MARCO^-/-基因型穩定遺傳;MARCO^-/-、MARCO^0＋/-、MARCO^＋/＋基因型比例約為1∶2∶1,符合孟德爾遺傳定律。以MARCO（-11 bp）為例,共獲得子五代（F5代）MARCO^-/-小鼠42只,MARCO^0＋/-小鼠92只,MARCO^＋/＋小鼠48只;上述3種基因型F5代小鼠出生后第4、6和8周的體質量分別比較,差異無統計學意義（P〉0.05）。與MARCO^＋/＋小鼠和MARCO^-/-（-36 bp）、MARCO^-/-（-61 bp）小鼠比較,MARCO^-/-（-11 bp）和MARCO^-/-（-46 bp）小鼠的MARCO蛋白相對表達水平均下調（P〈0.05）,選擇該2種小鼠模型作為MARCO基因敲除小鼠模型。結論成功鑒定MARCO基因敲除小鼠模型,為深入研究MARCO基因在小鼠矽肺纖維化中的作用及調控機制奠定基礎。
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