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不同基因型草魚呼腸孤病毒通用RT-PCR檢測(cè)方法的建立及應(yīng)用

范玉頂; 馬杰; 周勇; 江南; 劉文枝; 曾令兵 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院長(zhǎng)江水產(chǎn)研究所; 武漢430223; 愛達(dá)荷大學(xué)水產(chǎn)研究所魚類與野生動(dòng)物科學(xué)系; 莫斯科83844-1136; 美國(guó)

摘要：根據(jù)GenBank登錄的草魚呼腸孤病毒(grass carp reovirus,GCRV)不同基因型毒株編碼VP2蛋白的S2節(jié)段保守序列,設(shè)計(jì)1對(duì)簡(jiǎn)并引物,通過(guò)優(yōu)化反應(yīng)條件及靈敏度和特異性評(píng)價(jià),建立了一種能同時(shí)檢測(cè)三種基因型GCRV的通用RT-PCR檢測(cè)方法。結(jié)果顯示:該方法在三種基因型GCRV中均擴(kuò)增出大小約590 bp的特異性條帶;靈敏度試驗(yàn)結(jié)果顯示,該方法對(duì)于I、Ⅱ、Ⅲ型GCRV的檢測(cè)限分別為380、250和380拷貝/μL。該方法可特異性地檢測(cè)目前已知的三種基因型GCRV,而在大鯢虹彩病毒(GSIV)、錦鯉皰疹病毒(KHV)、鯉皰疹病毒Ⅱ型(CyHV-2)、鯉春病毒血癥病毒(SVCV)和傳染性脾腎壞死病毒(ISKNV)中無(wú)擴(kuò)增產(chǎn)物。利用該方法檢測(cè)49份草魚出血病疑似樣品,結(jié)果顯示均為GCRV陽(yáng)性,其中I型陽(yáng)性率為8.2%,Ⅱ型陽(yáng)性率為85.7%,Ⅲ型陽(yáng)性率為2%,I、Ⅱ型混合感染陽(yáng)性率為4.1%,其他類型的混合感染未檢測(cè)到。結(jié)果表明,本研究建立的針對(duì)I、Ⅱ和Ⅲ型GCRV的RT-PCR檢測(cè)方法具有通用性好、省時(shí)高效的突出特點(diǎn),同時(shí)還兼具較高的靈敏度和特異性。

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