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水痘-帶狀皰疹病毒糖蛋白gE在昆蟲細(xì)胞中的表達(dá)鑒定及其晶體培養(yǎng)

姚巧繽; 李婷婷; 榮芮; 張玉云; 李澤凱; 薛文輝; 李瑾瑾; 朱瑞; 程通; 顧穎; 夏寧邵; 李少偉 廈門大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院國家傳染病診斷試劑與疫苗工程技術(shù)研究中心; 福建廈門361102; 廈門大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院分子疫苗學(xué)與分子診斷學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室

摘要：目的利用桿狀病毒-昆蟲表達(dá)系統(tǒng)建立純化水痘帶狀皰疹病毒(VZV)包膜糖蛋白gE的方法,篩選gE蛋白的晶體培養(yǎng)條件,以期用于結(jié)構(gòu)解析。方法將VZV糖蛋白gE基因序列克隆至桿狀表達(dá)載體pAcgp67B載體中,利用High FiveTM昆蟲細(xì)胞表達(dá)gE蛋白并進(jìn)行TALON親和層析純化;利用WAVE生物波浪反應(yīng)器建立含硒代甲硫氨酸的gE蛋白方法,以便在晶體結(jié)構(gòu)解析中利用單波長或多波長異常散射進(jìn)行相位解析;通過分子排阻色譜、分析超離,差示掃描量熱法和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)等分析gE蛋白的理化性質(zhì);利用結(jié)晶試劑盒對gE498和gE354蛋白的結(jié)晶條件進(jìn)行初篩。結(jié)果獲得的gE498和gE354蛋白純度約為90%、產(chǎn)量為8~10 mg/L。理化分析顯示兩種gE蛋白在溶液中主要以均一穩(wěn)定的單體形式存在,并呈現(xiàn)出良好的反應(yīng)原性。在gE354晶體初篩中獲得3個(gè)結(jié)晶條件:CrystalH3、PEGH12和IndexB10。結(jié)論建立了VZV糖蛋白gE表達(dá)和純化方法,制備的蛋白純度高,且具有反應(yīng)原性,并篩選出CrystalH3、PEGH12和IndexB10這3個(gè)結(jié)晶條件,為gE糖蛋白的結(jié)構(gòu)與功能研究及新型疫苗開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。

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