【關(guān)鍵詞】 夜寧膠囊；急性毒性試驗(yàn)；Ames試驗(yàn)；小鼠

夜寧膠囊是解放軍全國心理疾病防治中心藥物研究室與江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司研制的新制劑中藥，本品由合歡皮、靈芝等組成。具有改善睡眠、鎮(zhèn)靜安神的功效，對(duì)失眠、睡眠不穩(wěn)、多夢(mèng)、頭暈頭昏的人有很好的作用。筆者通過急性毒性試驗(yàn)、遺傳毒性試驗(yàn)、30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)對(duì)夜寧膠囊進(jìn)行毒理作用的研究，以方便臨床用藥，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 樣品 夜寧膠囊［由江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司(批號(hào)041012、041014、041016)］，推薦成人服用量為4.5 g/60 kg·bw·d(每d 3次、每次3粒、內(nèi)含夜寧藥粉0.5 g/粒)。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 昆明種小鼠(南京中醫(yī)藥大學(xué)藥理研究中心動(dòng)物房提供，合格證號(hào)：蘇實(shí)動(dòng)證200412號(hào))，SD大鼠(南京中醫(yī)藥大學(xué)藥理研究中心動(dòng)物房提供，動(dòng)物合格證：蘇實(shí)動(dòng)證200412號(hào))。環(huán)境溫度18-22℃，相對(duì)濕度40-65%。

1.3 檢驗(yàn)儀器 XD811生化分析儀。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 急性毒性試驗(yàn)

2.1.1 小鼠急性毒性試驗(yàn) 選擇體重20-24 g健康昆明種小鼠20只，雌雄各半。受試物劑量為60 g·kg-1·bw、灌胃量為0.2 mL·10 g-1·bw，空腹連續(xù)ig 3次，每次間隔2 h，ig后4 h內(nèi)密切觀察小鼠活動(dòng)及死亡情況，喂養(yǎng)觀察14 d，記錄小鼠中毒表現(xiàn)及死亡情況。

2.1.2 大鼠急性毒性試驗(yàn) 選擇體重170-210 g健康SD大鼠20只，雌雄各半。受試物劑量為120 g·kg-1·bw。灌胃量為1 mL·100g-1·bw，空腹連續(xù)ig 4次，每次間隔2 h，ig后4 h內(nèi)密切觀察小鼠活動(dòng)及死亡情況，喂養(yǎng)觀察14 d，記錄大鼠中毒表現(xiàn)及死亡情況。

2.2 遺傳毒性試驗(yàn)

2.2.1 Ames試驗(yàn) 平板滲入法。試驗(yàn)設(shè)312.5、625、1250、2500、5000 μg/皿5個(gè)劑量組，同時(shí)設(shè)自發(fā)回變、溶劑對(duì)照及陽性對(duì)照組。每個(gè)組別均設(shè)5個(gè)平皿，37℃培養(yǎng)48 h，計(jì)數(shù)每皿回變菌落數(shù)。

2.2.2 小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn) 健康昆明種小鼠，體重25-30 g，雌雄各半，共60只。隨機(jī)分為6組、每組10只，雌雄各半。4個(gè)試驗(yàn)組受試物劑量分別為625、1250、2500、5000 mg·kg-1·bw，另設(shè)陰性對(duì)照(蒸餾水)和陽性對(duì)照組(環(huán)磷酰胺40 mg·kg-1·bw)。采用間隔24 h 2次ig法進(jìn)行試驗(yàn)，末次ig后6 h處死小鼠，取胸骨骨髓常規(guī)制片鏡檢，每鼠計(jì)數(shù)1000個(gè)嗜多染紅細(xì)胞、記錄微核細(xì)胞數(shù)，計(jì)算微核細(xì)胞發(fā)生率(千分率)。

2.2.3 小鼠精子畸形試驗(yàn) 健康昆明種，雄小鼠25只，體重26-30 g，隨機(jī)分為5組，每組5只。3個(gè)試驗(yàn)組受試物劑量分別為2.50、5.00、10.00 g·kg-1·bw，另設(shè)陰性對(duì)照(蒸餾水)和陽性對(duì)照組(環(huán)磷酰胺40 mg·kg-1·bw)。連續(xù)5 d ig給予受試物，首次ig后第35 d處死動(dòng)物，常規(guī)制片，每只動(dòng)物記數(shù)1000個(gè)結(jié)構(gòu)完整的精子，記錄畸變類型和數(shù)量，計(jì)算各組精子畸形率(百分率)。

2.3 30 d喂養(yǎng)試驗(yàn) 選擇SD健康離乳大鼠80只，平均體重雌(76.3±8.0) g，雄(81.0±8.0) g，按體重隨機(jī)分組法分為4組，每組20只，雌雄各半。以推薦人日常服用夜寧膠囊每天劑量4.5 g·60 kg·bw設(shè)計(jì)3個(gè)受試物組，夜寧膠囊劑量每天分別為2.0、4.0、8.0 g·kg·bw(相當(dāng)于推薦人日常服用劑量的25、50、100倍)。將受試物按大鼠體重的10計(jì)算食物攝入量分別摻入大鼠基礎(chǔ)飼料中喂養(yǎng)試驗(yàn)大鼠，對(duì)照組喂飼基礎(chǔ)飼料。各組動(dòng)物單籠喂養(yǎng)、自由攝食及飲水、每周稱體重1次并結(jié)算每鼠飼料攝入量，連續(xù)喂養(yǎng)30 d。試驗(yàn)結(jié)束后股動(dòng)脈取血進(jìn)行血液生化檢驗(yàn)，處死大鼠進(jìn)行各項(xiàng)病理指標(biāo)檢驗(yàn)。

2.4 觀察指標(biāo) 大鼠一般表現(xiàn)、體重、增重、進(jìn)食量及食物利用率。血液學(xué)指標(biāo)：血紅蛋白(Hb)、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(RBC)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)及分類、血小板計(jì)數(shù)(PLT)。血液生化指標(biāo)：血糖(GLU)、甘油三酯(TG)、膽固醇(CHO)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、谷丙轉(zhuǎn)酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、尿素氮(BU)、肌酐(CRE)。臟器系數(shù)：對(duì)肝、腎、脾進(jìn)行臟器/體重比值測(cè)定，計(jì)算臟器系統(tǒng)(臟器/體重×100)。病理學(xué)檢查：肉眼觀察試驗(yàn)動(dòng)物主要臟器病理改變，并對(duì)肝、腎、脾、胃、十二指腸、結(jié)腸進(jìn)行病理組織學(xué)切片檢查。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 急性毒性試驗(yàn) 灌胃給予受試物后，兩種性別小鼠和大鼠均未見明顯中毒癥狀，14 d內(nèi)動(dòng)物無死亡。因此認(rèn)為該受試物對(duì)兩種性別小鼠最大給藥量均大于60 g·kg-1·bw和大鼠的最大給藥量均大于120 g·kg-1·bw。

3.2 遺傳毒性試驗(yàn)

3.2.1 Ames試驗(yàn) 見表1。表1 夜寧膠囊Ames試驗(yàn)滲入法結(jié)果 注：以上結(jié)果為3個(gè)平皿的均值±標(biāo)準(zhǔn)差，①2AF:10 μg/皿 ②1，8二羧葸醌：50 μg/皿 ③敵克松：50 μg/皿 ④NaN3：1.5 μg/皿 ⑤甲基環(huán)酸乙酯：1.0 μl/皿。

由表1可見，2次試驗(yàn)中受試物各劑量組回變菌落數(shù)均未超過自發(fā)回變菌落數(shù)的2倍，亦無劑量2反應(yīng)關(guān)系，說明在加與不加S9時(shí)該樣品對(duì)鼠傷寒沙氏菌TA97、TA98、TA100、TA1024株試驗(yàn)菌株均未呈現(xiàn)致突變作用；但在-S9時(shí)，樣品在2500-5000μg/皿劑量范圍內(nèi)對(duì)測(cè)試菌株TA97、TA98、TA100、TA102具有明顯的抑制作用；在+S9時(shí)，樣品在2500-5000 μg/皿劑量范圍內(nèi)對(duì)測(cè)試菌株TA100也有明顯的抑菌作用。夜寧膠囊經(jīng)2次Ames滲入法試驗(yàn)，結(jié)果相近。

3.2.2 小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn) 受試物各劑量組微核率與陰性對(duì)照組之間無顯著性差異(P＞0.05)，而環(huán)磷酰胺陽性對(duì)照組與陰性對(duì)照組之間有高度顯著性差異(P＜0.01)，說明該樣品無致小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核增生作用。小鼠精子畸形試驗(yàn)：受試物各劑量組小鼠精子畸形率與陰性對(duì)照組之間無顯著性(P＞0.05)，而環(huán)磷酰胺陽性對(duì)照組之間有非常顯著性差異(P＜0.01)，說明該樣品無致小鼠精子畸形作用。

3.3 30 d喂養(yǎng)試驗(yàn) 經(jīng)試驗(yàn)各組大鼠體重、增重、進(jìn)食量及食物利用率和對(duì)照組比較未見明顯差異(P＞0.05)，結(jié)果為各組大鼠進(jìn)食、活動(dòng)及生長發(fā)育都正常。對(duì)大白鼠血常規(guī)及血生化指標(biāo)影響，經(jīng)試驗(yàn)可見各受試物劑量組主要生化指標(biāo)(GIU、CHO、TG、ALT、AST、TP、ALB、BUN、CRE)、全血常規(guī)指標(biāo)(Ub、RBC、PLT、WBC及分類)均在正常范圍人，和陰性對(duì)照組比較無明顯差異(P＞0.05)。主要臟器系數(shù)及病理組織學(xué)檢查，對(duì)全部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行大體肉眼解剖檢查，未發(fā)現(xiàn)異常，對(duì)高劑量組及對(duì)照組大鼠主要臟器肝、腎、脾、胃、十二指腸、結(jié)腸、進(jìn)行病理組織學(xué)切片檢查，未發(fā)現(xiàn)病變，對(duì)肝、腎、脾進(jìn)行臟器系數(shù)測(cè)定，各劑量組與對(duì)照組間無異常(P＞0.05)。

4 討論

夜寧膠囊內(nèi)容物為合歡皮、靈芝等提取的混合物。研究表明，具有改善睡眠、鎮(zhèn)靜安神的功效，對(duì)失眠、睡眠不穩(wěn)、多夢(mèng)、頭暈頭昏的人群有很好的作用。本試驗(yàn)證明夜寧膠囊屬無毒藥物，符合非處方藥物的使用要求。

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