作者：潘海峰，李艷榮，辛春蘭，李守拙

【摘要】 目的對金蓮花露毒理學安全性進行評價。方法清潔級昆明種小鼠、SD大鼠以金蓮花露各按最大耐受量（MTD）等體積灌胃，記錄中毒表現及死亡情況；采用平板摻入法，分加與不加S-9混合液兩種；選清潔級昆明種小鼠，取胸骨骨髓制片，查其骨髓嗜多染紅細胞微核發生率；選雄性小鼠，取附睪制片，查小鼠精子畸形率；30 d喂養實驗，觀察生長發育、食物利用率、血液學檢查和生化學檢查結果。結果雌雄性小、大鼠均未見明顯的中毒癥狀及死亡；在加與不加S-9的情況下，均未呈現致突變作用；小鼠微核實驗、小鼠精子畸形實驗均呈陰性；30 d喂養大鼠，全部存活，且發育良好，選定各指標均未見異常。結論金蓮花露對兩種性別的大、小鼠的MTD均大于20 000 mg/（kg·bw），說明該產品屬實際無毒物；三項致突變實驗結果陰性；大鼠30 d喂養實驗各項指標均無明顯異常。

【關鍵詞】 金蓮花露； 毒理學； 安全性評價

Abstract：ObjectiveTo assess the safety of Trollius Beverrage. MethodsThe experimental animals were Kunming mice and SD rats. Mice and rats were gastric infusion with MTD the same volume of Trollius Beverrage. Detoxification and death status were recorded. Flat plate incorporating method was used with 2 kinds of mixture solutions which were added S-9 or not. The sternal bone marrow of clean Kunming mice was isolated and driven film producer. A living rate of mouse bone marrow polychromatic erythrocyte micronucleus test was checked. The epididymis of the double sides in female clean Kunming mice was driven film producer. The rate of sperm teratogenicity was observed. Perform the results of the growth and development， food utilization rate， the check of blood and biochemistry after the animals were fed to keep experiment for 30 days. ResultsThe mice and rats were all not observed obvious poisoned symptom and death. Without adding S-9 condition， the mutation effect of all the animals didn't appear. The micronucleus test and the sperm teratogenicity test in mice were negative. All rats survived after feeding for 30 days. Animals in each group growth were good. No abnormal phenomenon was observed. ConclusionThe Trollius Beverrage's MTD of mice and rats was greater than 20000mg/(kg.bw). It was concluded that the product had no toxicity. The result of mutagenic test was negative and no abnormal phenomenon was observed after feeding for 30 days.

Key words：Trollius Beverrage; Toxicology; Safety assessment 金蓮花露［1，2］是以金蓮花為原料提取而制成的功能性飲品，具有清咽潤喉、清熱解毒之功效。目前，金蓮花的藥品和產品很多，本實驗僅對金蓮花露的毒理學安全性評價實驗進行研究?，F報道如下。

1 材料與方法

1.1 樣品由承德頸復康藥業集團提供，外觀為淡黃色液體，推薦量每人600 ml/d。因推薦量較大，本實驗采用噴霧干燥粉劑，外觀為黃色，推薦量為每人1.0 g/d。

1.2 實驗動物選用河北醫科大學實驗動物學部提供的清潔級昆明種小鼠（批準號為醫動字第04056號）及SD大鼠（批準號為醫動字第04057號）。

1.3 小鼠急性毒性實驗選用清潔級昆明種小鼠20只，體重18～22 g，雌雄各半，按最大耐受量（MTD）法進行試驗，劑量為20 000 mg/(kg·bw)，采用等體積灌胃法［0.2 ml/(10g·bw)］24 h內兩次灌胃，連續觀察兩周。記錄中毒表現及死亡情況。

1.4 大鼠急性毒性實驗選用SD大鼠20只，體重180～220 g，雌雄各半，按最大耐受量（MTD）法進行試驗，劑量為20 000mg/(kg·bw)，采用等體積灌胃法［2 ml/(100 g·bw)］24 h內兩次灌胃，連續觀察兩周。記錄中毒表現及死亡情況。

1.5 遺傳毒性實驗

1.5.1 Ames實驗本實驗采用平板摻入法，分加與不加S-9混合液兩種。劑量分別為：0.005，0.025，0.25，1.0，5.0 mg/皿，另設空白對照和陽性對照組。陽性對照組使用2-AF 20 μg/皿、2，4，7-TNFone 1 μg/皿、NaN3 2.5 μg/皿、絲裂霉素C 4.0 μg/皿、1，8二羥基蒽醌50 μg/皿，每個劑量組做3個平皿，重復做兩次。菌種為TA97(a)、TA98、TA100和TA100和TA102四株菌，由中國預防醫學科學院營養與食品衛生研究所提供，S9購自中國預防醫學科學院勞動衛生與職業病研究所，試劑從北京化學試劑公司購進。

1.5.2 小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核實驗選用清潔級昆明種小鼠50只，體重25～30 g，隨機分為5組，每組10只，雌雄各半；設3個計量組：2 500，5 000，10 000 mg/kg體重，同時設陰性對照組（蒸餾水）和陽性對照組（CP 40mg/kg），各組均間隔24 h兩次給樣，第2次給樣后6 h取胸骨骨髓制片，每只動物計數1 000個嗜多染紅細胞，查微核發生率。

1.5.3 小鼠精子畸形實驗選用清潔級昆明種雄性小鼠25只，體重30～35 g，隨機分為5組，每組5只，雌雄各半；設3個劑量組：2 500，5 000，10 000 mg/kg體重，同時設陰性對照組（蒸餾水）和陽性對照組（CP 40 mg/kg）。連續經口給樣5 d，從首次給樣計第35天處死動物，取雙側附睪制片，每只動物計數1 000個精子，查畸形率。

1.5.4 30 d喂養實驗選用清潔級SD大鼠80只，體重50～70 g，隨機分成4組，每組20只，雌雄各半，單籠飼養。受試物設3個試驗劑量，分別為0.84，1.67，3.34 g/kg體重（最高劑量相當于推薦量的200倍），另設一個陰性對照組。將受試物分別摻入到基礎飼料中喂飼各組動物，連續30 d。大鼠的進食量按其體重的10%計算，飼料中所含受試物分別為0.84%，1.67%，3.34%，陰性對照組只給基礎飼料。喂養期間各組動物均自由進食和飲水，每周稱鼠體重并記錄飼料消耗量一次，實驗末期采尾血進行血液學和生化學檢查。觀察指標有生長發育、食物利用率、血液學檢查（采用血球計數儀測定）、生化學檢查（分離血清后采用相應試劑盒及AutohumalyzerF1全自動生化分析儀測定）。實驗末期處死大鼠，解剖取肝、脾、腎、睪丸（卵巢）稱重，計算臟器系數，然后對肝、腎、胃、腸進行病理組織學檢查（石蠟切片）。

2 結果

2.1 小鼠急性毒性實驗金蓮花露在20 000 mg/kg.bw的劑量條件下，兩種性別的小鼠均未見明顯的中毒癥狀及死亡。雌雄小鼠MTD的攝入量均大于20 000 mg/(kg·bw)。

2.2 大鼠急性毒性實驗金蓮花露在20 000mg/(kg·bw)的劑量條件下，兩種性別的的大鼠均未見明顯的中毒癥狀及死亡。雌雄大鼠MTD的攝入量均大于20 000mg/(kg·bw)。根據急性毒性分級，金蓮花露屬無毒物。

2.3 遺傳毒性實驗

2.3.1 Ames實驗金蓮花露對TA97(a)，TA98，TA100，TA102四株試驗菌株，在加與不加S-9的情況下，均未呈現致突變作用。

2.3.2 小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核實驗金蓮花露3個劑量組的微核發生率均在正常范圍內，經統計學處理與陰性對照組比較無顯著性差異，與陽性對照組比較差異性顯著。該產品小鼠微核實驗陰性。

2.3.3 小鼠精子畸形實驗金蓮花露3個劑量組的精子畸形率均在正常范圍內，經統計學處理與陰性對照組比較無顯著差異，與陽性對照組比較差異顯著。該產品小鼠精子畸形實驗陰性。

2.4 30 d喂養實驗一般狀況：經過30 d喂養，大鼠全部存活，各組動物發育良好，未見異常特征。

2.4.1 對大鼠體重的影響金蓮花露對大鼠體重無顯著性差異。

2.4.2 對大鼠食物利用率的影響各組大鼠食物利用率與其對照組比較無顯著性差異。

2.4.3 血液學檢查實驗結束時，各組動物紅細胞、血紅蛋白、白細胞及分類均在正常范圍內。

2.4.4 末期生化檢驗結果實驗結束時，各組動物谷丙轉氨酶（速率法）、血糖（己糖激酶法）、尿素氮（紫外法）、總膽固醇（酶法）、甘油三酯（酶法）、肌酐（苦味酸兩點法）、總蛋白（雙縮脲法）、白蛋白（溴甲酚氯法）等指標均在正常范圍內波動。

2.4.5 金蓮花露對大鼠臟器系數的影響各組臟器系數均無顯著性差異。

2.5 解剖及病理組織學檢查大體解剖各組大鼠各臟器未見異常。病理組織學檢查各組大鼠的肝小葉結構正常，肝細胞無變化、壞死，小葉間無炎細胞浸潤和纖維組織增生；腎小球、腎小管結構正常，腎小管腎上皮細胞無變性、壞死，管腔內無異常物質，間質無炎細胞浸潤、出血和纖維組織增生；胃壁及十二指腸壁結構清晰完整，無出血、炎細胞浸潤，胃上皮細胞及腸黏膜上皮細胞無變性、壞死、缺損。未見金蓮花露對受試物組動物肝、腎、胃及腸產生特異性的病理改變。

3 小結 本實驗結果表明，金蓮花露對兩種性別的大、小鼠的MTD均大于20 000mg/（kg·bw），說明該產品屬實際無毒物；三項致突變實驗結果陰性；大鼠30 d喂養實驗各項指標均無明顯異常。