【摘要】 目的 采用高效液相色譜法建立洋金花藥材的指紋圖譜。方法 以Zorbarx C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)為色譜柱，0.07 mol/L磷酸鈉溶液(用磷酸調pH 6.0，含17.5 mmol十二烷基硫酸鈉)-乙腈(2∶1)為流動相，流速0.8 mL/min，檢測波長216 nm。結果 本方法重復性及精密度良好；聚類分析結果顯示，南洋金花與北洋金花化學成分有明顯差異。結論 本法可有效控制洋金花藥材的質量。

【關鍵詞】 洋金花；指紋圖譜；氫溴酸東莨菪堿；高效液相色譜法

Key words：Flos Daturae；fingerprint；scopolamine；HPLC

2005年版《中華人民共和國藥典》(一部)收載洋金花為茄科植物白花曼陀羅Datura metel L.的干燥花。另外，地方用藥還有茄科曼陀羅屬(Datura)植物毛曼陀羅D.innoxia的花，前者稱為“南洋金花”，后者稱為“北洋金花”。洋金花屬劇毒藥品，具平喘鎮咳、鎮痛、解痙的功效，用于哮喘咳嗽、脘腹冷痛、風濕痹痛以及外科麻醉等。迄今，洋金花中已被分離鑒定了39種生物堿和13種內酯成分，其中主要有效成分為東莨菪堿和莨菪堿。目前國內多采用滴定法[1]、薄層掃描法[2]、氣相色譜法及高效液相色譜法(HPLC)[3-4]對其中某個生物堿進行分析，但不能有效控制藥材的內在質量。本試驗通過考察10批不同來源的洋金花藥材(包括南洋金花、北洋金花)，建立了指紋圖譜，并對不同種的洋金花測定結果進行了聚類分析。

1 儀器與試藥

Agilent 1100 Series型高效液相色譜儀；氫溴酸東莨菪堿對照品購自中國藥品生物制品檢定所(批號0049-9507，供含量測定用)；乙腈為色譜純；其余試劑均為分析純。

洋金花藥材由江蘇省藥品檢驗所劉舞霞主任藥師進行鑒定，分別為白花曼陀羅Datura metel L.或毛曼陀羅D.innoxia的干燥花，即南洋金花或北洋金花。詳見表1。

2 色譜條件與系統適用性試驗 色譜柱：Zorbarx C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動相：0.07 mol/L磷酸鈉溶液(用磷酸調pH至6.0，含17.5 mmol/L十二烷基硫酸鈉)-乙腈(2∶1)；流速：0.8 mL/min；檢測波長：216 nm。理論板數按氫溴酸東茛菪堿峰計算應不低于4 000。色譜圖見圖1。表1 10批洋金花來源（略）

3 試驗方法

3.1 參照物溶液的制備

由于洋金花中東茛菪堿含量高，且與其他成分分離較好，出峰時間適宜(保留時間為24 min左右)，故選東茛菪堿為參照物。精密稱取氫溴酸東茛菪堿對照品適量，用0.07 mol/L磷酸鈉溶液(用磷酸調pH至6.0)使溶解，制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作為對照品溶液。

3.2 供試品溶液的制備

取藥材粉末(過3號篩)約1 g，精密稱定，加入2 mol/L鹽酸溶液10 mL，超聲處理30 min(頻率：40 kHZ，功率：250 W，溫度：25～30 ℃)，放冷， 濾過，濾液用濃氨試液調pH值至14，用氯仿振搖提取4次，每次10 mL，合并氯仿液，置溫水浴上蒸干，殘渣用0.07 mol/L磷酸鈉溶液(用磷酸調pH至6.0)定量轉移至5 mL量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，即得。

3.3 方法學考察

3.3.1 穩定性試驗

取同一供試品溶液，分別在0、2、4、6、10、15、24 h進樣測定。結果表明：峰面積比值占總峰面積5%以上的峰，其色譜峰的相對保留時間和峰面積的比值基本一致，溶液24 h內基本穩定。

3.3.2 精密度試驗 取同一供試品溶液，連續進樣5次，在上述色譜條件下考察各共有峰的相對保留時間及峰面積比值的一致性。結果表明：峰面積比值占總峰面積5%以上的峰，其色譜峰的相對保留時間和峰面積的比值RSD＜3%，符合中藥指紋圖譜的技術要求。

3.3.3 重復性試驗

取同一份藥材，按上述供試品溶液制備方法平行制得5份供試品溶液，依法測定。結果表明：峰面積比值占總峰面積5%以上的峰，其色譜峰的相對保留時間和峰面積的比值RSD＜3%，符合中藥指紋圖譜的技術要求。

3.4 10批樣品HPLC指紋圖譜測定

取10批不同來源的洋金花藥材，按上述供試品溶液制備方法制備10份供試品溶液。精密吸取10份供試品溶液和對照品溶液各10 μL，分別注入液相色譜儀，按照上述色譜條件記錄60 min的色譜峰。以氫溴酸東茛菪堿峰的保留時間及峰面積為1，計算各共有指紋峰的相對保留時間和峰面積比值。

4 10批洋金花藥材化學模式識別研究

4.1 原理

系統聚類法的基本思想是：先將n個樣本各自看成一類，然后規定樣本之間的距離。開始，因每個樣本自成一類，類與類之間的距離是相等的，選擇距離最小的兩類或多類合并成一個新類，并計算該新類和其他類的距離，再將距離最近的兩類合并，這樣每次減少一類，直至所有樣本都成為一類為止。 類與類之間的距離有許多定義的方法，不同的定義就產生了系統聚類的不同方法。常用的有最短距離法、最長距離法、中間距離法、重心法、類平均法、離差平方和法等。

4.2 方法與結果

將10批洋金花藥材指紋圖譜數據分別讀入程序計算，采用歐氏最近距離及平均距離方法分別進行聚類，范圍標度化預處理，結果見圖2。 聚類分析結果表明：來源為武漢、蘇州的洋金花(經專家鑒定為北洋金花)所含成分與其他來源的洋金花藥材(經專家鑒定為南洋金花)所含成分的聚類距離最遠，在歐氏最近距離聚類及歐氏平均距離聚類分析法中來源為武漢、蘇州的洋金花(北洋金花)所含成分距離接近并為一類。說明不同種的洋金花藥材(南洋金花與北洋金花)成分有較明顯的差異，而同種的洋金花藥材間成分相對接近。

5 討論 以硅膠為基質的反相鍵合填料表面不同程度地殘存硅醇基，殘存的硅醇基與待分離的堿性物質相互作用而導致峰嚴重拖尾及分辨率降低。所以，反相HPLC法在生物堿的分析中常需調整流動相的pH值，使用一定離子類型和濃度的緩沖液作為流動相，并利用二次添加劑(主要指離子對試劑)改善分離。本試驗采用離子對色譜技術，即在流動相中加入十二烷基硫酸鈉作為對離子，在適當pH值下與莨菪烷類生物堿結合形成離子對，從而使性質相似的莨菪烷類生物堿在反相色譜系統中獲得適當保留和較好分離。為了達到《中藥指紋圖譜研究的技術要求(暫行)》中的規定，應選擇出峰數目比較多、各共有峰響應盡可能相當者，作為指紋圖譜的測定波長，以便表達更多的信息。本試驗通過DAD檢測，選取216 nm作為檢測波長。在此波長處，各峰分離良好，且各峰響應值均較大。 本試驗通過考察10批不同來源的洋金花藥材，建立了指紋圖譜，并對不同種的洋金花測定結果進行了聚類分析。二種聚類分析結果基本一致，不同種的洋金花藥材(南洋金花與北洋金花)成分有較明顯的差異，而同種的洋金花藥材間成分相對接近。由于中藥發揮藥效的物質基礎是各種化學成分的協同作用，所以，單純考察南洋金花與北洋金花中東茛菪堿成分的含量，不足以判斷臨床用藥上北洋金花是否可以替代南洋金花用藥。建立標準指紋圖譜準確鑒別藥材對全面控制藥材質量、指導臨床用藥具有很大的意義。

【參考文獻】 1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].北京：化學工業出版社，1985.228. [2] 何麗一.止咳喘熱參片中有效成分含量測定[J].中成藥研究，1986， 12(4)：8. [3] 葉崇義.洋金花藥材中東莨菪堿和莨菪堿氣相色譜法測定[J].中草藥， 1981，12(11)：13. [4] 于霖匯.反相高效液相色譜法測定洋金花藥材中東莨菪堿的含量[J].藥物分析雜志，1999，19(3)：174.