作者：夏從龍，段新瑜，何華斌，楊蘭，李枉桉，楊雪蓮

【摘要】 目的用高效液相色譜法測不同來源的民族藥巖陀藥材中巖白菜素的含量，為資源利用提供依據。方法Zorbax SB- C18色譜柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)，流動相：甲醇- 水（含0.1%磷酸）17∶83，流速：0.80 ml/min，檢測波長：275nm，柱溫30℃。結果巖白菜素線性范圍為3.05～10.98 μg，相關系數r = 0.999 9，其平均回收率為101.17%（n＝5），RSD為 1.56 %。結論在民間作為巖陀使用的植物根莖中都含有巖白菜素，但種間差異較大，且與產地和采收期有一定的關系。

【關鍵詞】 巖陀； 民族藥； 巖白菜素； 高效液相色譜法

Abstract：ObjectiveTo analyze and compare the content of bergenin in 3 species of Rodgersia and to supply a basis for the resources exploitation.MethodsThe chromatographic assay of bergenin was performed on Zorbax SB- C18 column(4.6 mm×150 mm，5 μm) with a flow rate of 0.80 ml/min.The mobile phase consisted of CH3OH-0.1%H3PO4(17∶83) .The detection wavelength was at 275 nm，and the column temprature was maitained at 30℃ . ResultsThe result indicated good linearity over the range of 3.05～10.98 μg with coefficients(r)of 0.999 9 .ConclusionThis experimenal results show that those plants used for Yuantuo in folk medicine contain bergenin，but the difference is notable.

Key words：YanTuo; Ethnodrug ; Bergenin; HPLC 巖陀為白族、傈族民間習用的民族藥， 藥材的傈僳文名為埃陀，白族則習稱散藥，為虎耳草科植物羽葉鬼燈檠Rodgersia pinnata Franch.，西南鬼燈檠Rodgersia sambucifolia Hemsl.或七葉鬼燈檠Rodgersia aesculifolia Batal.的干燥根莖。其根莖具有收斂、消炎、祛風除濕的功效，對菌痢、腸炎、感冒頭痛、外傷出血、風濕骨痛、老年性支氣管炎等常見疾病有較好的療效［1］。巖陀根莖中主要含有糖類、鞣質、巖白菜素、槲皮素及山萘酚等黃酮類成分［2］。其止咳的主要成分為巖白菜素（bergenin），因巖白菜的資源減少，現主要從巖白菜屬中巖白菜Bergenia purpurascens Hook. f. et Thoms.鬼燈檠屬中西南鬼燈檠Rodgersia sambucifolia Hemsl.的根莖中提取巖白菜素，經多年的開發利用，上述兩種植物面臨資源短缺。本實驗對3種鬼燈檠植物根莖中巖白菜素的含量進行了含量測定，為擴大藥源和合理開發利用資源提供有用的數據。

1 儀器與材料 1100 LC高效液相色譜儀（美國Agilent公司）；UV1100紫外可見分光光度計（上海天美科學儀器有限公司）；SK5200H超聲波清洗器（上海科導超聲儀器有限公司）；梅特勒－托利多電子天平（梅特勒－托利多儀器－上海有限公司）。甲醇（美國天地公司）為色譜純，水為重蒸水。其余試劑為分析純。 巖白菜素對照品購自中國藥品生物制品檢定所，批號為1532-200202。 實驗材料（產地見含量測定項）由作者本人鑒定為虎耳草科植物羽葉巖陀Rodgersia pinnata Franch. ，西南鬼燈檠Rodgersia sambucifolia Hemsl.和七葉鬼燈檠Rodgersia aesculifolia Batal.的干燥根莖。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 ZORBAX SB- C18色譜柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)；流動相為甲醇- 水（含0.1%磷酸）17∶83；檢測波長:275 nm；流速:0.80 ml/min；柱溫:30℃。在該色譜條件下，巖白菜素被洗脫且達到基線分離，保留時間為11.33 min。按巖白菜素峰計算，理論塔板數應不低于5 000。

2.2 對照品及供試品溶液的制備

2.2.1 對照品儲備液 精密稱取對照品巖白菜素6.10 mg置10 ml容量瓶中，以甲醇溶解并定容，配制成對照品儲備液，濃度為0.61 mg/ml。

2.2.2 樣品溶液 精密稱取粉碎過60目篩的樣品各1 g，置于錐形瓶中，加入20 ml甲醇，浸泡5 h，超聲提取45 min，濾過，以甲醇洗滌錐形瓶及濾渣3次，每次1 ml，定容置25 ml容量瓶中［3］，作為儲備液使用。

2.3方法學考察

2.3.1 線性關系考察 精密量取對照品儲備液（0.61 mg/ml）5，8，12，15，18 μl注入高效液相色譜儀中，按選定的色譜條件進行測定，記錄色譜圖及峰面積。以峰面積的積分值定量，以進樣量（μg）為橫坐標，峰面積（A）為縱坐標，繪制標準曲線，并進行回歸分析，巖白菜素的回歸方程為： A= 1 829.569 2C+ 67.575 6r = 0.999 9 線性范圍為：3.05～10.98 μg。

2.3.2 精密度實驗 取巖白菜素對照品（0.61 mg/ml）溶液，連續進樣5次，每次進樣5 μl。分別測定峰面積，計算RSD為0.17%(n=5)。表明進樣精密度良好。

2.3.3 重復性實驗精密稱取同一批七葉鬼燈檠粉末5份，每份1 g，分別按樣品溶液的處理方法制備樣品液，進樣5 μl，在給定的色譜條件下測定巖白菜素的峰面積，計算RSD為1.71%。

2.3.4 穩定性實驗將同一樣品溶液隔0，1，2，4，6，12 h進樣5μl，在選定的色譜條件下測定巖白菜素的峰面積，計算RSD為1.16%。表明樣品溶液在12 h內穩定。

2.3.5 加樣回收實驗取已知含量的同一供試品溶液5份，分別添加對照品適量（巖白菜素：0.42 mg/ml溶液0.5 ml），按樣品溶液處理方法操作，測得巖白菜素的平均回收率為101.17%；RSD為1.56%。

2.4 樣品含量測定 分別取供試品溶液，進樣5 μl，在給定的色譜條件下，測定巖白菜素的峰面積，采用對照品對照法計算其含量，結果見表1～2（不同采收期的羽葉鬼燈檠、七葉鬼燈檠采自劍川縣）。巖白菜素對照品及樣品圖譜見圖1。

表1 3種巖陀藥材及巖白菜根莖中巖白菜素的含量（略）

表2 不同采收期兩種巖陀藥材中巖白菜素的含量（略）

圖1 HPLC圖（略）

3 討論

3.1 檢測波長的選擇應用紫外可見分光光度計UV1100 在190～400 nm范圍內對巖白菜素進行紫外掃描，并結合三維圖，發現該化合物有兩個吸收峰，分別位于220 nm和275 nm，考慮流動相中甲醇在220 nm波長處對基線有影響，故實驗中檢測波長選為275 nm。

3.2 流動相與色譜柱的選擇本實驗曾比較過文獻報道過的多種流動相：甲醇－水（25∶75），甲醇－水（45∶55），甲醇－醋酸－水（12∶0.5∶88）等系統［3～5］，經過反復多次實驗，選擇本文“2.1”項色譜條件；加0.1%磷酸可抑制拖尾。我們還對3種色譜柱［ZORBAX SB- C18色譜柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)， ZORBAX DB- C18色譜柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)，ZORBAX XDB- C18色譜柱(4.6 mm×150 mm，5 μm) ］進行比較，在該色譜條件下，以ZORBAX SB- C18色譜柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)分離度較好，柱效高。 通過測定發現，3 種巖陀藥材中以西南鬼燈檠Rodgersia sambucifolia Hemsl.根莖中巖白菜素的含量最高，以七葉鬼燈檠Rodgersia aesculifolia Batal .根莖中巖白菜素的含量最低。同種巖陀藥材在不同產地（采自同一月份）巖白菜素的含量也有差異。采于同一產地不同采收期的巖陀藥材中巖白菜素的含量有明顯的差異，以8月份含量最低，故作者認為最佳采收期為5月份前、10月份后。