作者：董琳 付雪艷 權洪峰 徐力生

【摘要】 目的通過對種子生活力等指標的測定，為完善水飛薊種子檢驗標準操作規程提供實驗依據。方法采用2，3，5-氯化三苯四氮唑(TTC)染色法測定種子的活力。結果種子生活力測定最佳條件：溫度為40℃，TTC濃度為0.4%，染色時間為30min。結論TTC染色率為95%。

【關鍵詞】 水飛薊； 種子； 2，3，5-氯化三苯四氮唑； 生活力

Abstract：ObjectiveTo provide the experiment for consummate the Silybum marianum seed viability certification standard through the target determination of the seed and so on. MethodsDetermine the seed viability by the TTC dyeing method. ResultsThe optcivul conltions of Seed viability was as fouows: the temperature was 40 ℃， the TTC density was 0.4%， and the dyeing time was 30min. ConclusionTTC dyeing rate is 95%.

Key words：Silybum marianum; Seed; TTC; Viability

種子活力是種子生理學的一個新領域［1］，對藥用植物而言，種子活力的高低不僅會影響植物的生長，而且直接影響到藥材質量，以及人們的用藥安全。目前，國內外對種子活力的研究局限于農作物、蔬菜種子，而對于中藥材種子的研究報道還較少，這極大限制了中藥材種子研究技術的發展。水飛薊來源于菊科植物水飛薊 Silybum marianum (L.) Gaertn.的干燥成熟果實，其性涼，味苦，歸肝、膽經，具有清熱解毒，舒肝利膽的功效。本實驗對寧夏六盤山地區水飛薊種子進行生活力等指標的測定，得到了較滿意的結果。

1 儀器與試藥

水飛薊種子采自寧夏六盤山，經寧夏固原藥檢所鑒定為水飛薊 Silybum marianum (L.) Gaertn.種子；2，3，5-氯化三苯四氮唑（TTC）試劑由北京中昊生物有限公司提供；稀甘油、水合氯醛試液均按《中國藥典》2005年版Ⅰ部附錄ⅩⅤB規定方法配制。

Olympus雙目顯微鏡；分析天平（1/103）（上海精密科學儀器有限公司）；DHJ-9140A型電熱恒溫鼓風干燥箱（上海一恒科學儀器有限公司）。

2 方法與結果

2.1 種子凈度的測定依據《GB/T 3543.3 農作物種子檢驗規程》，將樣品分成凈種子、廢種子、其他植物種子、雜質4部分，分別稱重（0.5 g以下精確至0.001 g，1～9 g者精確至0.01 g）。將所稱量的各數據記錄下來，按以下公式計算凈度：

種子凈度（%）=（試樣質量－廢種子質量－夾雜物質量）/試樣質量×100%。

試樣質量為4.98 g，廢種子質量為0.579 2 g，夾雜物質量為0.241 5 g，由公式得種子的純凈度為83.5%。

2.2 種子水分的測定依據《GB/T 3543.6 農作物種子檢驗規程》，采用恒溫烘干法測定，首先精密稱量恒重后的稱瓶(M1)，然后精密量取藥用植物種子鮮重(G)，均勻鋪在稱瓶里，將稱瓶迅速放入烘箱中，保持（105±2）℃，5h后取出，放入干燥器冷卻40 min后，稱取稱瓶的重量(M2)。以上稱量重復3次，取其平均值，通過下列公式計算種子水分：水分（%）= G－(M2－M1)/G×100%。經稱量，G=4.901 3 g，M1=39.860 9 g，M2=44.475 8 g，由公式得種子的水分為5.8%。

2.3 千粒重的測定依據《GB/T 3543.7 農作物種子檢驗規程》，種子經過凈度分析后，隨機數取1000粒，重復3次稱重。實驗測得千粒重為28.0526g。

2.4 生活力測定

2.4.1 因素水平考察選擇TTC溶液濃度、染色時間、染色溫度3個因素，每個因素選擇3個水平，設定因素水平表，見表1。表1 因素水平表

2.4.2 溶液的配制稱取磷酸二氫鉀9.078 g，磷酸氫二鈉11.876 g，分別溶于1 000 ml蒸餾水中，按體積比為2∶3混合，作為緩沖液；稱取TTC藥品1g，溶于100 ml緩沖液中，得1%TTC溶液，pH為6.5～7.5，存放于棕色試劑瓶中，放于暗處，備用。使用時以蒸餾水稀釋成不同濃度。

2.4.3 染色將浸好的種子沿中軸縱切（兩部分均含胚及胚芽），放入培養皿中，每個培養皿中100粒。將不同濃度的TTC溶液滴入直至浸沒種子，置恒溫箱中觀察。另取100粒種子放入100℃的沸水中蒸煮10 min后，取出，染色，作為參照。

2.4.4 實驗結果以染色率為指標進行分析，結果及方差分析見表2～3。表2 L9(34)正交實驗結果表3 方差分析

方差來源離差平方和自由度方差F值顯著性PA203321016.527.85<0.05B17772888.524.34<0.05C7532376.510.32 D（誤差）73236.5

F0.05(2，2)=19.0， F0.01(2，2)=99.0

由R值可知，各因素對試驗結果的重要次序為A>B>C，由方差分析可知，TTC溶液濃度和染色時間對染色率有顯著性影響， 染色溫度對染色率的影響無顯著性差異，且溫度升高到40℃以上，染色率有下降的趨勢。綜合各種因素，選定種子生活力測定最佳條件為A2B3C2，即TTC濃度為0.4%，染色時間為30 min，溫度為40℃。

2.4.5 種子生活力測定條件驗證試驗為考察上述測定條件，按該條件進行重復試驗3次，測定水飛薊種子染色率，結果平均得率為95%。

3 討論

種子檢驗是保證種子質量的主要手段。統一標準的檢驗方法及程序是保證檢驗公證性和可靠性的前提條件［2］。目前我國的中藥材種子只是藥材生產中的一種副產品，無種子質量監督、檢驗和管理機構，種子檢驗研究也剛剛起步。種子活力是種子質量的一個綜合指標，本實驗通過對寧夏產中藥材水飛薊種子生活力等指標的測定，確定種子的純凈度、千粒重、水分及生活力，為完善水飛薊種子檢驗標準操作規程提供實驗依據。