作者：楊永壽， 肖培云， 劉光明

【摘要】 目的建立蜚蠊藥材的質(zhì)量控制方法。方法采用薄層色譜法定性鑒別，色譜條件為正丁醇-醋酸-水（5∶1∶1），0.5%茚三酮顯色劑；采用索氏提取法測定脂肪含量；水分測定法檢查水分的最低控制限；分光光度法測定總氨基酸的含量，茚三酮顯色后檢測波長為570 nm。結(jié)果蜚蠊藥材與對(duì)照品薄層色譜斑點(diǎn)清晰，易于識(shí)別，藥材中脂肪的含量不得超過7.0%，水分含量不得超過12.0%，分光光度法測定總氨基酸含量，回歸方程：A=0.067 943C+0.009 143，r =0.999 9， 酪氨酸含量在1.0～10.0 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。結(jié)論該方法簡便易行，重復(fù)性好，可用于蜚蠊藥材的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】 蜚蠊藥材 薄層色譜法 索氏提取法 水分測定法 分光光度法

Abstract：ObjectiveTo establish the quality control of Roach. MethodsTLC was used to identify the quality of Roach. The chromatographic condition was n-butanol-HAc-H2O(5∶1∶1)， and the developer was triketohydrindene hydrate (0.5%);Soxhlet's extraction was used for the determination of fat; moisture content was detected by the Aquametry; the content of amino acids was determined by Absorption spectrometry， the developer was triketohydrindene hydrate， and the warvlength was 570 nm.ResultsRoach spots and control article spots were very clear by TLC identification. The fat content of Roach was less than 8.0%， and the Moisture content was less than 12.0%. The amino acids were measured by absorption spectrometry and the regression equation was A=0.067 943C+0.009 143，(r=0.999 9)，the calibration curve for amino acids showed good linear correlation within the concentration range of 1.0～10.0 μg. The average recovery of the method was 100.36%，RSD was 1.85%. ConclusionThe methods are simple and repmducible， and can be used for quality control of Roach.

Key words：Roach； TLC； Soxhlet's extraction； Aquametry； Absorption spectrometry

蜚蠊(Roach)為昆蟲綱蜚蠊目，蜚蠊科，俗稱蟑螂，全世界發(fā)現(xiàn)并記載的蟑螂種類約三千余種，廣泛分布于熱帶、亞熱帶地區(qū)，在我國也有廣泛分布。蜚蠊作為藥用最早載于《神農(nóng)本草經(jīng)》中［1］。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，蜚蠊中含有對(duì)肝炎、心腦血管疾病、肺癌及惡性纖維瘤有顯著療效的活性成分［2～4］，并且以蜚蠊藥材為原料開發(fā)出“康復(fù)新滴劑”“心脈龍注射液”“肝龍膠囊”等國家系列新藥。但蜚蠊藥材在長期的使用過程中一直沒有規(guī)范的國家標(biāo)準(zhǔn)，致使藥材在飼養(yǎng)過程中無相應(yīng)規(guī)范要求，藥材質(zhì)量無法得到保證。研究表明，蜚蠊藥材中主要有效成分為氨基酸和蛋白質(zhì)［5］，但藥材在飼養(yǎng)過程中，養(yǎng)殖廠家為追求其重量，在飼料中加入大量脂肪成分，致使藥材品質(zhì)下降，并且給藥廠生產(chǎn)增加了處理成本，加上蜚蠊藥材為富營養(yǎng)的動(dòng)物藥，水分含量的高低將直接影響藥材的質(zhì)量及存放時(shí)間，因此必須加以控制。蜚蠊藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立，將為該藥材提供科學(xué)、可靠的質(zhì)量檢測方法，同時(shí)可對(duì)蜚蠊藥材的規(guī)范化養(yǎng)殖提供理論依據(jù)。

1 儀器與試劑

島津UV2550紫外-可見分光光度計(jì)，梅特勒電子天平AE240（瑞士），索氏提取器，DZKW-4水浴鍋（上海科析實(shí)驗(yàn)儀器廠），超聲波清洗器（上海科導(dǎo)超聲儀器公司），ZY紫外分析儀（上海安亭），硅膠G254 (青島海洋化工廠)。酪氨酸、亮氨酸、丙氨酸、a-氨基丙酸、甘氨酸對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所生產(chǎn)，批號(hào):0856-200507，0833-200534，0832-200511，0853-200508，0815-200523），其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取80℃減壓干燥至恒重的酪氨酸對(duì)照品10.0 mg，置100 ml容量瓶中，加0.02 mol/L的NaOH溶液10 ml，水浴加熱至完全溶解，加水至刻度，搖勻，即得濃度為100.0 μg/ml的酪氨酸對(duì)照品溶液（含量測定用）。

精密稱取80℃干燥至恒重的亮氨酸、丙氨酸、氨基丙酸、甘氨酸各2.0 mg，用50%甲醇稀釋10 ml，得濃度為200.0 μg/ml的對(duì)照品溶液（薄層鑒別用）。

2.2 供試品溶液的制備

取粉碎后的供試品10 g，精密稱定，置燒瓶中加95%的乙醇100 ml水浴回流提取3次，1 h/次，過濾，合并濾液，殘?jiān)蛹s30～40 ml水，水浴加熱，充分溶解，放冷后過濾，除去脂肪，用少量水洗滌燒瓶及漏斗兩次，濾液于比色管中定容至50 ml，加活性炭0.5 g，振搖，過濾，濾液即為供試品溶液。

2.3 藥材的薄層色譜鑒別

取“2.2”項(xiàng)制備的供試品溶液，另取“2.1”項(xiàng)制備的亮氨酸、丙氨酸、氨基丙酸、甘氨酸對(duì)照品溶液，吸取上述溶液各5 μl，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以正丁醇∶醋酸∶水(5∶1∶1)的溶液為展開劑，展開約10～15 cm，取出，晾干，用0.5%的茚三酮溶液噴霧顯色，檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)。樣品與對(duì)照品的薄層色譜圖見圖1。

2.4 藥材中脂肪含量的控制測定

蜚蠊藥材中脂肪的含量參考國家標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)GB9695.1- 1988《肉與肉制品- 游離脂肪含量的測定》，使用索氏抽提法，用石油醚抽提樣品中的脂肪。然后于水浴上回收溶劑，蒸干后95～105℃干燥2 h稱量，計(jì)算樣品中脂肪含量，結(jié)果見表1。表1 蜚蠊藥材脂肪含量測定結(jié)果（略）

從表1可得，人工飼養(yǎng)的蜚蠊藥材中脂肪的含量明顯高于自然生長的藥材，這給藥廠的生產(chǎn)增加了處理成本，因此，有必要控制藥材中脂肪的含量。根據(jù)大量的實(shí)驗(yàn)及藥廠生產(chǎn)的經(jīng)驗(yàn)，本文將蜚蠊藥材中脂肪的含量控制在7.0%以內(nèi)。

2.5 藥材中水分含量的控制取人工飼養(yǎng)的蜚蠊藥材適量，60℃真空減壓干燥至恒重，按表2取干燥后的藥材，并按比例加入一定量的水，混合均勻后于250 ml廣口試劑瓶中密封保存，25℃恒溫放置，每隔15 d取樣觀測，以考察水分含量與藥材穩(wěn)定性之間的關(guān)系，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。表2 蜚蠊藥材中水分與存放時(shí)間的關(guān)系（略） 從表2可知，蜚蠊藥材中水分的含量不得超過12.0%，否則藥材很容易發(fā)生腐敗變質(zhì)，故藥材中水分應(yīng)控制在12%以內(nèi)。

2.6 藥材中總氨基酸的含量測定

2.6.1 測定波長的選擇

取“2.1”項(xiàng)下配制的酪氨酸對(duì)照品溶液，加入1ml pH=5.0的檸檬酸緩沖液和1 ml茚三酮顯色劑，搖勻，水浴加熱15 min，取出，冷卻至室溫，加入60%乙醇3 ml，搖勻，在紫外-可見分光光度計(jì)上于400～700 nm范圍內(nèi)進(jìn)行全波長掃描，酪氨酸在570 nm處有最大吸收。故選擇570 nm為蜚蠊藥材中總氨基酸含量測定波長。

2.6.2 線性關(guān)系考察

精密吸取“2.1”項(xiàng)中制備好的酪氨酸溶液0，0.1，0.3，0.5，0.7，0.9，1.0 ml于10 ml容量瓶中，分別加入1 ml pH=5.0的檸檬酸緩沖液和1 ml 0.5%的茚三酮溶液，搖勻，水浴加熱15 min，取出，冷卻至室溫，分別加入60%乙醇3 ml，定容，搖勻，照分光光度法于570 nm處測定吸光度A［6］。以吸收度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：A=0.067 943C+0.009 143，r= 0.999 9，結(jié)果表明酪氨酸含量在1.0～10.0 μg范圍之間呈良好的線性關(guān)系。

2.6.3 樣品中總氨基酸的測定

精密吸取供試品溶液1.0 ml于10ml容量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法自“分別加入1 ml檸檬酸緩沖液”起，依法測定吸收度，用標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算出供試品溶液中氨基酸的含量（μg），并照下列公式換算為蜚蠊中總氨基酸的含量： 總氨基酸（mg/g）=（C×2.5×0.662）÷（W-W×水分含量%）

W為供試品含量（g）；C為氨基酸含量（μg）；2.5為樣品在配制過程中的稀釋倍數(shù)；轉(zhuǎn)換系數(shù)0.662是氨基酸的平均分子量120除以酪氨酸的的分子量181.2所得。

2.6.4 精密度實(shí)驗(yàn)

精密吸取同一供試品溶液，重復(fù)測定5次，總氨基酸含量的RSD為2.36%。

2.6.5 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

精密吸取同一供試品溶液，分別在放置0，1，2，3，4，5，6 h后測定，總氨基酸含量的RSD為1.97% ，表明供試品溶液在6 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6.6 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

取同一批樣品，按“2.2”項(xiàng)下的方法制備5份供試品溶液，依法測定，蜚蠊藥材中總氨基酸含量的RSD為1.64%，表明方法重復(fù)性較好。

2.6.7 加樣回收率實(shí)驗(yàn)

取已知含量的蜚蠊藥材樣品5份，1.0 g/份，分別加入對(duì)照品酪氨酸8.0 mg，依法進(jìn)行樣品處理和測定，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果總氨基酸的加樣回收率為100.36%，RSD為1.85%，方法的回收率較好。結(jié)果見表3。表3 回收率實(shí)驗(yàn)（略）

2.6.8 樣品測定

按上述供試品溶液的制備方法和測定條件，測定了5批不同產(chǎn)地人工飼養(yǎng)的蜚蠊藥材中總氨基酸含量，結(jié)果見4。表4 蜚蠊藥材中總氨基酸的含量測定（略）

3 討論

從本研究建立的薄層色譜測定方法來看，薄層色譜展開系統(tǒng)分離效果好，斑點(diǎn)清晰，不拖尾，藥材供試品與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)。 由于蜚蠊藥材中主要有效成分為氨基酸、蛋白質(zhì)和多肽等富營養(yǎng)物質(zhì)，水分含量過高易引起腐敗變質(zhì)，故藥材中水分含量控制在12%以下有利于藥材的保存。 含量測定方法操作簡單，重復(fù)性好，可用于藥品生產(chǎn)企業(yè)及生產(chǎn)基地對(duì)蜚蠊藥材的質(zhì)量控制。 從對(duì)不同產(chǎn)地、不同采集時(shí)間的藥材中總氨基酸含量的測定結(jié)果來看，藥材中有效成分總氨基酸的含量有一定的地域性差異，同一地區(qū)的藥材不同批次間也有差異，這可能與生長環(huán)境、喂養(yǎng)飼料及采集時(shí)間不同有關(guān)系。

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