作者：周旌 李明東 林琪玲 李映紅 陳茵

【摘要】 目的：觀察抗毒復(fù)明滴眼液對單純皰疹性角膜炎的治療效果。方法：將實(shí)驗(yàn)性單純皰疹性角膜炎小鼠隨機(jī)分為抗毒復(fù)明滴眼液治療組、無環(huán)鳥苷對照組和溶劑對照組，對3組角膜病變進(jìn)行觀察與比較。結(jié)果：抗毒復(fù)明滴眼液 治療組角膜病變范圍較溶劑組明顯縮小（P < 0.05）。結(jié)論：抗毒復(fù)明滴眼液對實(shí)驗(yàn)性單純皰疹性角膜炎有明顯的治療 效果。

【關(guān)鍵詞】 抗毒復(fù)明滴眼液；單純皰疹性角膜炎；實(shí)驗(yàn)藥效學(xué)

An Experimental Study on Herpes Simplex Kerafitis Vith Kangdufuming Eye Drops

〔Abstract〕 Objective To observe the therapeutic effects of Kangdufuming eye drops on experimental HSK.Methods The infected rabbits with HSK were pided random into the treated group with Kangdufuming eye drops， control group treated with acyclovir eye drops and solvent group. The pathologic changes of the cornea were observed and compared between 3 groups.Results The cornea ulcer areas of the treatment group were smaller than solvent group (P < 0.05).Conclusion Kangdufuming eye drops could be markedly effect in treatment of experimental rabbit with HSK.

〔Key Words〕Kangdufuming eye drops; Herpes simplex keratitis; Experimental effectiveness

單純皰疹性角膜炎（herpetic stromal keratitis， HSK）是一種常見的嚴(yán)重致盲性眼病，占角膜病致盲的首位[1-3]。該病由單純皰疹病毒（HSV）感染所引起，可導(dǎo)致角膜溶解、新生血管形成及潰瘍穿孔等嚴(yán)重病理改變[2]，是當(dāng)今世界上危害最嚴(yán)重的感染性眼病之一， 占角膜病致盲的 63.2%，近年來由于抗生素、皮質(zhì)類固醇及其他免疫抑制劑的廣泛應(yīng)用，其發(fā)病率有逐年上升趨勢[3-5]。由于 HSK 病情頑固，易于復(fù)發(fā)，嚴(yán)重影響視功能，已成為眼科臨床的棘手問題，因而受到學(xué)者們的重視和關(guān)注。本研究觀察了本病治療中藥科研制劑抗毒復(fù)明滴眼液對 HSV-1SM44 毒株感染誘導(dǎo)的單皰病毒性角膜炎病理模型的干預(yù)效果。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

選用鼠齡為 4~6 周 Balb/c 小鼠 30 只（中山大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供），體重 16~18 g，清潔級，雌雄各半。

1.2藥物

①抗毒復(fù)明滴眼液為自制科研制劑：取大青葉、貫眾、虎仗、決明子等經(jīng)生藥鑒定后，清水洗凈，再用純凈水洗 2 次，然后用純凈水浸泡 30 min，煎煮 2 次，收集餾液；合并 2 次煎煮液過濾，餾液加入濾液，過濾，分裝于 8 mL 的眼藥瓶中，相當(dāng)于生藥材 1.83 g/mL。100℃滅菌 30 min，置 4℃儲存?zhèn)溆谩＂?.1% 無環(huán)鳥苷滴眼液由湖北黔江制藥廠生產(chǎn)。

1.3HSK 模型建立

1.3.1病毒和細(xì)胞病毒 HSV-1SM44 毒株（武漢大學(xué)醫(yī)學(xué)院病毒研究所提供），使用前滴度為 20×109 pfu·L-1。生產(chǎn)和檢測病毒的細(xì)胞為非洲綠猴腎細(xì)胞（VERO）。培養(yǎng) VERO 細(xì)胞的營養(yǎng)液為含 5% 胎牛血清、青霉素（100×103 U·L-1）、鏈霉素（0.1 g·L-1）的 DMEM。

1.3.2角膜接種病毒的方法將小鼠用 1% 地卡因表面麻醉后置于顯微鏡下，用 1 號無菌針頭交叉劃傷雙眼角膜上皮層呈“#”字形，將 5 L 含有 100× 103 pfu 病毒的 DMEM 滴于角膜表面，同時(shí)輕輕按摩小鼠眼瞼 10 s。

1.4判斷病變程度

按文獻(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)[4]，稍加改動(dòng)，作病變程度判斷標(biāo)準(zhǔn)：0 級：無著色和混濁；1 級：著色和混濁的范圍為原病變（壓痕）范圍 1/4 以內(nèi)；2 級：著色和混濁的范圍為原病變（壓痕）范圍 1/4~1/2；3 級：著色和混濁的范圍為原病變（壓痕）范圍 1/2~3/4；4 級：著色和混濁的范圍為原病變（壓痕）范圍 3/4 以上或無變化。

1.5實(shí)驗(yàn)分組處理

將造模后的動(dòng)物按病情輕重分層隨機(jī)分成 3 組，每組 10 只：第 1 組用注射用水滴眼（對照組）；第 2 組用無環(huán)鳥苷滴眼液滴眼（無環(huán)鳥苷組）；第 3 組用抗毒復(fù)明滴眼液。均每天 5 次（間隔 2 h）滴眼，每次 1 滴，連續(xù) 15 d。

各組分別于 0、3、7、11、15 d 分別由專人進(jìn)行小鼠角膜 2% 熒光素鈉染色，裂隙燈顯微鏡記錄角膜病變范圍。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

使用 SPSS 13.0 統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料進(jìn)行方差分析和 q 檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用 Ridit 分析。

2研究結(jié)果

2.1用藥前各組角膜病變范圍比較

差異無顯著性（檢驗(yàn) P > 0.05），具有可比性，見表 1。

2.2各組小鼠角膜病變動(dòng)態(tài)觀察比較

結(jié)果見表 2。由表 2 可以看出溶劑對照組接種后第 3 天，角膜出現(xiàn)點(diǎn)狀、樹枝狀病灶，然后不斷擴(kuò)大；第 7~9 天后出現(xiàn)密集的樹枝狀和地圖狀潰瘍，基質(zhì)層水腫、浸潤。第 11~13 天病變向深層發(fā)展，上皮潰瘍逐漸縮小，個(gè)別自愈。抗毒復(fù)明滴眼液治療組接種后第 3 天，角膜可見點(diǎn)狀、樹枝狀病變，范圍較局限；5~7 d 時(shí)病情較重，角膜出現(xiàn)基質(zhì)水腫、浸潤。但與溶劑對照組角膜病變范圍比較差異有顯著性（P < 0.01）；到 13 d 大部分小鼠角膜病變已痊愈，表明抗毒復(fù)明滴眼液有明顯抑制或減輕實(shí)驗(yàn)性單純皰疹性角膜炎病變的療效。無環(huán)鳥苷對照組抑制角膜上皮病變的療效與抗毒復(fù)明滴眼液治療組近似，在平均治療 7 d 后角膜病變減輕，兩組治療有效時(shí)間相比差異無顯著性（P > 0.05）。

3討論

HSK 是由單純皰疹病毒（HSV）感染所致，其主要臨床表現(xiàn)為點(diǎn)狀角膜炎，病情靜止期，病毒沿神經(jīng)末梢軸索上行，以亞病毒形式潛伏于三叉神經(jīng)節(jié)細(xì)胞內(nèi)，在各種誘因的刺激下，病毒再度活化而引起復(fù)發(fā)感染，臨床上分別表現(xiàn)為點(diǎn)狀、樹枝狀、地圖狀、盤狀[1-5]。治療通常用無環(huán)鳥苷，局部或全身應(yīng)用免疫增強(qiáng)劑、干擾素、胸腺肽等。效果尚欠佳，且易復(fù)發(fā)。無環(huán)鳥苷可以競爭性地抑制 HSV-I，對淺層性 HSK 和深層型 HSK 均有效，國內(nèi)外眼科科界認(rèn)為它是一種較安全、首選的治療 HSK 的藥物[5，7，8]。但無環(huán)鳥苷目前尚存在一些缺陷：口服只有 15%~30% 生物利用度；局部應(yīng)用可引起濾泡性結(jié)膜炎、淺點(diǎn)狀角膜炎、假樹枝狀角膜炎等等，還偶見有引起急性腎功能衰竭和神經(jīng)毒性報(bào)道；對無環(huán)鳥苷耐藥的毒株出現(xiàn)增多，對此目前也只能加強(qiáng)耐藥性的監(jiān)測，還沒有針對的辦法[9-11]。

單純皰疹病毒性角膜炎屬中醫(yī)眼科黑睛生翳范疇，臨床表現(xiàn)類似于“聚星障”[6]。近年來，西醫(yī)結(jié)合">中西醫(yī)結(jié)合防治 HSK 已經(jīng)積累不少寶貴的經(jīng)驗(yàn)，在辨證、選方、制劑以及對 HSK 復(fù)發(fā)的認(rèn)識和治療上，有了長足的發(fā)展。但分析現(xiàn)狀，亦存在不足，如選方繁多，用藥不一，“各承家技”；中藥滴眼液生產(chǎn)、推廣有待加強(qiáng)；中藥抗復(fù)發(fā)機(jī)制有待進(jìn)一步研究等[6，12，13]。

中醫(yī)認(rèn)為黑晴直接與外界接觸，易感六淫之邪。其中以風(fēng)熱多見[12]。《證治準(zhǔn)繩·雜病·七竅門》曰： “翳膜者，風(fēng)熱重則有之。”《原機(jī)啟微·風(fēng)熱不制之病》：“因熱而召，是為外來；久熱不散，感而自生，是為內(nèi)發(fā)。”內(nèi)外致病因素所致黑晴病變是相似的。五輪學(xué)說認(rèn)為黑晴屬風(fēng)輪，內(nèi)應(yīng)肝膽，所以本病的發(fā)生與肝膽功能失常有關(guān)。所以，黑晴易受風(fēng)熱邪毒乘襲，內(nèi)應(yīng)與肝，常為肝火上炎所累。因此，其治療應(yīng)以疏風(fēng)解毒、清肝明目為基本大法。抗毒復(fù)明方就是我們根據(jù)中西醫(yī)對本病病理生理的認(rèn)識，基于疏風(fēng)解毒、清肝明目的原則，結(jié)合臨床用藥經(jīng)驗(yàn)，篩選而成的治療本病的中藥復(fù)方制劑。無環(huán)鳥苷是一種有較高選擇性的抗HSV-1 的藥物，能阻斷 HSV-1 的 DNA 合成及抑制HSV-1 復(fù)制，大量臨床試驗(yàn)證明其療效確切。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果，抗毒復(fù)明方具有顯著的抗 HSV-1 作用，對實(shí)驗(yàn)性單純皰疹性角膜炎有明顯的療效，但對其具體作用機(jī)理還有待于進(jìn)一步研究。本研究同時(shí)表明：對 HSK 的治療，中醫(yī)藥確有獨(dú)到之處，中西醫(yī)結(jié)合取長補(bǔ)短、優(yōu)勢互補(bǔ)，有利于發(fā)揮中醫(yī)藥特色，進(jìn)一步提高 HSK 的臨床療效。