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檢測(cè)豬鼻支原體抗原的ELISA方法的建立及其應(yīng)用

朱紅振; 危艷武; 黃立平; 劉丹; 夏德利; 吳洪麗; 邊海橋; 馮力; 劉長(zhǎng)明 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所獸醫(yī)生物技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室; 黑龍江哈爾濱150069

摘要：為了建立檢測(cè)豬鼻支原體(Mhr)抗原的ELISA方法,本研究采用雜交瘤技術(shù)制備了抗Mhr菌體的特異性單克隆抗體(MAb),經(jīng)親和層析純化后標(biāo)記辣根過氧化物酶(HRP),建立了一種能夠檢測(cè)Mhr抗原的ELISA方法。ELISA反應(yīng)條件優(yōu)化結(jié)果為:HRP標(biāo)記的MAb最適稀釋度為1∶1000,該方法的批內(nèi)和批間變異系數(shù)均小于6%,經(jīng)超聲波處理Mhr抗原效果更佳,最低抗原檢出量為25ng。用該方法對(duì)已知豬肺炎支原體(Mhp)、豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)抗原檢測(cè)無交叉反應(yīng)。本研究建立的檢測(cè)Mhr抗原的ELISA方法具有良好的特異性、敏感性和重復(fù)性,可為Mhr體外培養(yǎng)物抗原定量檢測(cè)提供可靠的技術(shù)手段。

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