豬德爾塔冠狀病毒SYBR GreenⅠ熒光定量PCR檢測方法的建立及應用
摘要：為建立豬德爾塔病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)快速靈敏的診斷方法,采用RT-PCR方法擴增豬德爾塔冠狀病毒(PDCoV)M基因,將M基因克隆到載體pEASY-Blunt Cloning Kit,以構建出的重組質粒作為標準陽性質粒,并以此為模板建立PDCoVM基因的SYBR GreenⅠ熒光定量PCR檢測方法,并對該方法進行敏感性、特異性和重復性等驗證。結果,建立的SYBR GreenⅠ熒光定量PCR方法的Ct值與標準品模板在6.57×10^8~6.57×10^1copies/L范圍內呈良好的線性關系,相關系數為0.999,斜率為-4.215;該方法特異性強,對PEDV和TGEV豬常見病原檢測均無特異性擴增;可重復性良好,組內和組間變異系數均小于2%;靈敏度可達6.57×10^1copies/L;對臨床樣品的檢測,本研究建立的SYBR GreenⅠ熒光定量PCR方法的陽性檢出率為5.0%。上述結果表明,本研究成功建立了檢測PDCoV的SYBR GreenⅠ熒光定量PCR方法,可實現對PDCoV的快速靈敏診斷。
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