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甲基結(jié)合蛋白1對小鼠胚胎干細胞增殖及克隆形態(tài)的影響

張鵬; 楊紅蘭; 劉含; 周艷華; 楊燕; 范安然; 何志旭; 舒莉萍 貴州醫(yī)科大學(xué)細胞工程生物醫(yī)藥技術(shù)國家地方聯(lián)合工程實驗室; 組織工程與干細胞實驗中心; 貴州省再生醫(yī)學(xué)重點實驗室; 貴州貴陽550004; 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院成體干細胞轉(zhuǎn)化研究重點實驗室; 貴州貴陽550004; 遵義醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院兒科學(xué)教研室; 貴州遵義563000

摘要:目的:研究甲基結(jié)合蛋白1(Mbd1)對小鼠胚胎干細胞克隆形態(tài)及增殖的影響。方法:設(shè)計針對Mbd1轉(zhuǎn)錄起始位點的gRNA,將表達有g(shù)RNA和Cas9蛋白的質(zhì)粒使用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法轉(zhuǎn)入小鼠胚胎干細胞(J1);使用抗生素將未轉(zhuǎn)染成功的細胞殺死后,細胞繼續(xù)培養(yǎng)7d,挑取單克隆細胞,采用PCR法篩選敲除Mbd1的純合子細胞,觀察Mbd1缺失對小鼠胚胎干細胞克隆形態(tài)的影響;使用細胞計數(shù)法檢驗Mbd1對胚胎干細胞增殖的影響。結(jié)果:通過Cripsr/Cas9成功獲得敲除Mbd1的胚胎干細胞,Mbd1缺失后的小鼠胚胎干細胞喪失了常規(guī)小鼠胚胎干細胞的3D克隆形態(tài),細胞呈現(xiàn)單層扁平克隆;Mbd1缺失后小鼠胚胎干細胞增殖速率變慢。結(jié)論:Mbd1通過影響小鼠胚胎干細胞克隆形態(tài)和增殖而影響胚胎干細胞的多能性。

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