作者：張鵬; 彭濤; 范安然; 蘭金芝; 何志旭; 舒莉萍; 周艷華 刊期：2019年第06期

目的:探討Alexa Fluor 488 NHS Ester染料用于提高流式細(xì)胞周期檢測(cè)結(jié)果的可行性。方法:以293細(xì)胞作為研究對(duì)象,采用兩種方案進(jìn)行細(xì)胞周期檢測(cè),每種方案設(shè)4組;方案一,按照細(xì)胞周期檢測(cè)試劑盒的說明書對(duì)4組細(xì)胞進(jìn)行染色;方案二,先對(duì)4組細(xì)胞用0.0、0.4、2.0及10.0 mg/L的Alexa Fluor 488 NH S Ester染料染色15 min,然后將4組細(xì)胞混合在一支試管中...

作者：張鵬; 舒莉萍; 周艷華; 范安然 刊期：2019年第06期

目的:驗(yàn)證HEK293-Tau細(xì)胞的外泌體中是否存在Tau蛋白、及Tau蛋白是否能夠在細(xì)胞間通過外泌體傳播。方法:通過經(jīng)典的超速離心結(jié)合超濾法分離HEK293-Tau細(xì)胞的外泌體,通過透射電鏡分析外泌體形態(tài)、采用Western blot鑒定外泌體特異性標(biāo)記物(HSP70、CD63及CD9)及外泌體和細(xì)胞培養(yǎng)液中Tau蛋白表達(dá)。結(jié)果:超速離心結(jié)合超濾法成功地分離了HEK293-Tau細(xì)...

作者：張鵬; 崔冬冰; 舒莉萍; 范安然 刊期：2019年第06期

目的:構(gòu)建3種淀粉樣前體蛋白(APP)胞外結(jié)構(gòu)域突變體細(xì)胞株并進(jìn)行功能的初步驗(yàn)證。方法:通過Touch down PCR的方法擴(kuò)增E1結(jié)構(gòu)域缺失的APP695片段以及E1和信號(hào)肽雙缺失的片段,采用融合PCR的方法擴(kuò)增E2結(jié)構(gòu)域缺失的APP695片段,并將獲得的片段連接于pCMV-APP695載體中得到APP胞外結(jié)構(gòu)域突變體質(zhì)粒;質(zhì)粒轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞后,添加G418篩選表達(dá)APP胞外結(jié)構(gòu)域...

作者：張鵬; 楊紅蘭; 劉含; 周艷華; 楊燕; 范安然; 何志旭; 舒莉萍 刊期：2019年第06期

目的:研究甲基結(jié)合蛋白1(Mbd1)對(duì)小鼠胚胎干細(xì)胞克隆形態(tài)及增殖的影響。方法:設(shè)計(jì)針對(duì)Mbd1轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)的gRNA,將表達(dá)有g(shù)RNA和Cas9蛋白的質(zhì)粒使用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法轉(zhuǎn)入小鼠胚胎干細(xì)胞(J1);使用抗生素將未轉(zhuǎn)染成功的細(xì)胞殺死后,細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)7d,挑取單克隆細(xì)胞,采用PCR法篩選敲除Mbd1的純合子細(xì)胞,觀察Mbd1缺失對(duì)小鼠胚胎干細(xì)胞克隆形態(tài)的影響;使用...