三種淀粉樣前體蛋白胞外結構域突變體的建立及功能驗證
摘要：目的:構建3種淀粉樣前體蛋白(APP)胞外結構域突變體細胞株并進行功能的初步驗證。方法:通過Touch down PCR的方法擴增E1結構域缺失的APP695片段以及E1和信號肽雙缺失的片段,采用融合PCR的方法擴增E2結構域缺失的APP695片段,并將獲得的片段連接于pCMV-APP695載體中得到APP胞外結構域突變體質粒;質粒轉染CHO細胞后,添加G418篩選表達APP胞外結構域突變體的單克隆細胞系;通過Western blot方法檢測APP胞外結構域突變體的表達及胞外分泌水平,分析信號肽對該突變體分泌的影響。結果:成功獲得了APP的E1結構域突變體、E1/信號肽雙缺失突變體以及E2結構域突變體細胞株,且APP突變體可以正常表達和分泌,但是信號肽缺失后APP突變體可以表達、而不能分泌。結論:APP的E1和E2結構域對APP蛋白的胞外分泌無影響。
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