紅曲霉中桔霉素定量分析及其合成相關(guān)基因簇的研究
摘要:目的對(duì)紅曲霉中真菌毒素桔霉素進(jìn)行定量分析,并研究桔霉素合成相關(guān)基因簇,為從基因水平上對(duì)桔霉素的產(chǎn)生進(jìn)行調(diào)控、提高紅曲霉相關(guān)食品的安全性提供理論依據(jù)。方法采用高效液相色譜(HPLC)法對(duì)3株紅曲霉(紫色紅曲霉YY-1、M2,叢毛紅曲霉FJ-1)在液態(tài)發(fā)酵過(guò)程中產(chǎn)生的桔霉素開展定量分析,采用二代測(cè)序技術(shù)鑒定桔霉素合成基因簇的序列特征,應(yīng)用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)法進(jìn)行相關(guān)基因表達(dá)水平分析。結(jié)果在固態(tài)培養(yǎng)和液態(tài)發(fā)酵過(guò)程中,3株紅曲霉菌體生長(zhǎng)情況無(wú)明顯差異;在液態(tài)發(fā)酵過(guò)程中,HPLC結(jié)果顯示M2桔霉素產(chǎn)量最高,其次為YY-1,FJ-1產(chǎn)量最少;M2、YY-1、FJ-1桔霉素合成基因簇相似度達(dá)99.9%;膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因(orf5)、聚酮合酶基因(pksCT)、氧化還原酶基因(ctnB)、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白基因(ctnA)、脫氫酶基因(orf1、ctnE)六個(gè)基因表達(dá)水平在M2中最高,在FJ-1中最低。結(jié)論桔霉素的產(chǎn)量差異與桔霉素合成基因簇所表達(dá)酶的種類無(wú)關(guān),而與其基因表達(dá)的調(diào)控相關(guān)。
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