奶牛溶菌酶基因(Lyz)乳腺特異性表達質粒構建與鑒定
摘要：研究旨在構建具有高效抗菌、活性持久的奶牛乳腺特異性表達質粒,探索研制新型抗菌制劑,為利用基因工程技術防治奶牛乳房炎提供重要材料。根據GenBank中奶牛溶菌酶基因(lysozyme,Lyz)mRNA序列(GenBank號:NM_180999.1)設計引物,從奶牛乳腺上皮細胞中RT-PCR擴增Lyz基因編碼序列,將其克隆到攜帶增強型綠色熒光蛋白通用型表達載體pEGFP-N1中測序。重組質粒pEGFP-N1-Lyz經AseI+HindIII雙酶切除CMV啟動子,將奶牛乳腺特異性表達β-乳球蛋白基因(BLG)啟動子同源重組替換到AseI和HindIII酶切位點,構建奶牛溶菌酶基因(Lyz)乳腺特異性表達質粒pBLG-EGFP-N1-Lyz,采用脂質體法轉染奶牛乳腺上皮細胞(BMEC)、人腎臟上皮細胞(HEK293T),熒光顯微鏡檢測轉染細胞中綠色熒光蛋白的表達情況。結果表明,重組表達質粒pBLG-EGFP-N1-Lyz測序結果與目的片段長度相符,轉染至BMEC細胞和HEK293T細胞,在奶牛乳腺上皮細胞觀察到綠色熒光,HEK293T細胞未觀察到綠色熒光,奶牛Lyz基因乳腺特異性表達質粒構建成功。
注: 保護知識產權,如需閱讀全文請聯系家畜生態學報雜志社
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