馬氏珠母貝(Pinctada fucata martensii)Pm-HSP70基因的克隆及其對溫度脅迫的響應
摘要：本實驗利用RACE技術克隆獲得了馬氏珠母貝HSP70 (Pm-HSP70)基因,并對其基因和氨基酸序列結構特征進行了生物信息學分析,同時采用熒光定量PCR技術分析了該基因在不同組織的表達模式及不同溫度下的時序表達模式。序列分析表明,Pm-HSP70 cDNA序列全長為2 215 bp,其中開放式閱讀框1 899 bp,5’UTR 107 bp,3’UTR 209 bp,編碼632個氨基酸,理論蛋白分子量為69.44 kD,理論等電點為5.61。該蛋白具有HSP70家族典型的結構域HSP70,以及ATP結合位點、細胞質特征性保守序列和3個HSP70家族標簽。多序列比對結果表明Pm-HSP70與菲律賓蛤仔HSP70同源性最高,為80%;系統進化分析發現,Pm-HSP70與菲律賓蛤仔等貝類HSP70聚為一支。組織表達定量分析結果顯示,Pm-HSP70在馬氏珠母貝多個組織中均有表達,在肝胰腺中表達量最高,其次是性腺;對不同溫度下鰓組織中Pm-HSP70的時序表達分析發現,在處理后各時間點高溫組(32℃)基因表達水平最高,且均顯著高于對照組(22℃)和低溫組(17℃)。以上結果表明Pm-HSP70可能參與馬氏珠母貝的高溫脅迫響應。該研究為進一步探索Pm-HSP70在馬氏珠母貝溫度適應性中的作用提供了基礎資料。
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