非洲豬瘟病毒p54抗原C端的原核表達及多克隆抗體的制備與鑒定
摘要：利用大腸埃希菌表達非洲豬瘟病毒核心抗原p54蛋白C末端55個氨基酸的肽段(命名為p54-2),制備了多克隆抗體并進行了純化,以進一步用于非洲豬瘟ELISA試劑盒的研發。將PCR擴增獲得的p54-2目的片段與表達載體pGEX6p-1質粒均經過限制性內切BamHⅠ和XhoⅠ雙酶切后,構建pGEX6p-1-ASFV-P54-2原核表達質粒。將該質粒轉化到大腸埃希菌BL21中,誘導蛋白大量表達,并純化獲得高純度的蛋白。將純化的p54-2蛋白免疫小鼠,獲得p54-2多克隆抗體并進一步純化多抗。用ELISA、Westernblot對純化的多克隆抗體進行效價滴定及特異性鑒定。結果顯示,成功構建了pGEX6p-1-ASFV-P54-2重組質粒,在大腸埃希菌中IPTG誘導下,能夠高效表達重組p54-2蛋白。用p54-2蛋白免疫Balb/c小鼠獲得的多克隆抗體經ELISA檢測其抗體效價為1∶128000,說明該蛋白有很好的免疫原性。Westernblot結果顯示,制備的多克隆抗體能特異性識別非洲豬瘟病毒p54胞內區,具有較高反應性和特異性,可以用于ELISA檢測方法研究和p54抗原表位的鑒定。
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