毛皮動物源大腸埃希菌毒力基因二重PCR檢測方法的建立
摘要：為了建立一種能夠快速檢測毛皮動物源大腸埃希菌耶爾森菌強毒力島(HPI)中irp2、FyuA毒力基因的二重PCR方法,根據GenBank中irp2、FyuA基因的序列,設計并合成兩對引物,擴增得到irp2、FyuA基因片段,大小分別為300bp和951bp。據此建立雙重PCR方法,并將反應條件進行了優化。結果表明,用所建立的二重PCR方法可同時特異性擴增出大腸埃希菌irp2、FyuA毒力基因片段,對沙門菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、克雷伯菌均無特異性擴增。菌液最低檢出量為2.8×105CFU/mL。在78份臨床樣品檢測中,二重PCR檢測結果與常規PCR檢測結果一致。所建立的大腸埃希菌irp2、FyuA毒力基因二重PCR檢測方法具有很好的特異性和靈敏度,能夠提高臨床樣品檢測的效率。
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