正調控元件拷貝數對黑曲霉PglaA啟動子的影響
摘要：為獲得轉錄水平更高的強啟動子,提高黑曲霉中重組蛋白表達量,研究在黑曲霉葡萄糖淀粉酶基因啟動子PglaA基礎上,構建分別含2、4、6個拷貝的正調控元件片段PglaA2R、PglaA4R、PglaA6R啟動子。以黑曲霉木聚糖酶基因xynB為目的基因,研究正調控元件拷貝數對PglaA啟動子的影響。構建黑曲霉表達載體pSZHG2R-xynB、pSZHG4R-xynB、pSZHG6R-xynB,采用農桿菌介導法轉化黑曲霉CICC2462。獲得目的基因表達框整合在葡萄糖淀粉酶基因位點的純合黑曲霉重組菌株PglaA2R-xynB、PglaA4R-xynB、PglaA6R-xynB。經SDS-PAGE檢測觀察到重組菌株分泌約24.0ku木聚糖酶蛋白條帶。經酶活檢測表明,木聚糖酶活力在第8天達最高,重組菌株PglaA4R-xynB(7705.36U mL^-1)、PglaA6R-xynB(8466.32U mL^-1)比PglaA2R-xynB(5890.77U mL^-1)分別提高1.31倍和1.44倍。熒光定量PCR結果表明,重組菌株PglaA4R-xynB、PglaA6R-xynB的xynB基因mRNA比PglaA2R-xynB分別提高2.2倍和5.3倍。可知,PglaA啟動子正調控元件多拷貝顯著提高木聚糖酶表達。
注: 保護知識產權,如需閱讀全文請聯系東北農業大學學報雜志社
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