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山羊IL-1βIL-8和Mx1因子實時熒光定量檢測方法的建立

孫文超; 易馳喆; 汪偉; 曹亮; 張世亨; 閉璟珊; 韋顯凱; 辛佳亮; 李文杰; 張克龍; 鄭敏; 魯會軍; 張紅云; 蘇姣秀 溫州大學病毒學研究所; 浙江溫州3250352; 軍事科學院軍事獸醫研究所; 吉林長春130122; 廣西動物疫病預防控制中心; 廣西南寧530001; 廣西大學動物科技學院; 廣西南寧530004

摘要：根據GenBank羊炎性細胞因子(IL-1β和IL-8)和Mx1保守序列,設計特異性引物,利用SYBR Green I染料法建立實時熒光定量檢測方法。將羊IL-1β、IL-8和Mx1細胞因子基因保守區域克隆到pMD18-T載體,構建標準質粒。分別以標準質粒為模板建立熒光定量PCR反應的標準曲線、熔解曲線。結果表明,羊IL-1β、IL-8和Mx1細胞因子實時熒光定量檢測方法Ct值與標準品呈良好的線性關系,R^2均大于0.990,所有稀釋度標準品模板出現特異性熔解峰。應用所建立的方法對山羊痘病毒AV41感染山羊外周血淋巴細胞中IL-1β、IL-8和Mx1 mRNA表達水平進行檢測,山羊痘病毒AV41可以刺激機體產生較高的炎性細胞因子。建立的羊IL-1β、IL-8和Mx1細胞因子熒光定量檢測方法,可以為山羊痘病毒感染后分子免疫機制研究奠定基礎。

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