產氣莢膜梭菌α毒素C末端的二拷貝串聯表達與免疫原性分析
摘要：本研究旨在獲得產氣莢膜梭菌α毒素(CPA)C末端(第247-370位氨基酸,CPAC)二拷貝串聯融合蛋白,并評價其免疫原性。對已知的A型產氣莢膜梭菌CPAC編碼基因進行優化設計,將其以同向串連的方式串聯成二拷貝基因(GCPAC2),經人工合成獲得基因片段GCPAC2。將GCPAC2克隆至原核表達載體pET-30a(+)中進行表達與純化,獲得重組蛋白rCPAC2。利用Western Blot方法檢測rCPAC2與A型產氣莢膜梭菌毒素抗血清的反應性。隨后,用rCPAC2免疫家兔,并檢測一免及二免后兔血清的中和抗體效價。在二免21 d后,經耳緣靜脈注射1個家兔MLD的A型產氣莢膜梭菌毒素,檢測rCPAC2對家兔的免疫保護效果。結果表明,rCPAC2主要以包涵體的形式表達且能與A型產氣莢膜梭菌毒素抗血清反應。每毫升的一免和二免抗血清分別可中和30個和80個小鼠MLD的A型產氣莢膜梭菌毒素。1個兔MLD的A型產氣莢膜梭菌毒素攻毒后,對照組4/4死亡,免疫組得到了100%(4/4)的保護。以上結果說明,rCPAC2具有良好的免疫原性,從而為A型產氣莢膜梭菌病基因工程疫苗的研制提供了重要的實驗數據。
注: 保護知識產權,如需閱讀全文請聯系中國獸醫雜志社
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