作者：路薇薇，吳敏，奚政君，姚俊宇

【摘要】 目的 觀察納米辛夷揮發油脂質體對鼻黏膜纖毛的毒性。方法 以生理鹽水和鹽酸麻黃堿為陰性對照，采用離體法觀察納米辛夷揮發油脂質體對蛙上腭黏膜纖毛維持自身擺動的持續時間，采用在體法及電鏡技術觀察納米辛夷揮發油脂質體對大鼠鼻黏膜的局部毒性。結果 納米辛夷揮發油脂質體對蛙上腭黏膜纖毛的活性影響較低，對大鼠鼻黏膜毒性較小。結論 納米辛夷揮發油脂質體對黏膜無明顯毒性作用。

【關鍵詞】 納米；辛夷；鼻黏膜；蛙上腭黏膜；過敏性鼻炎

Influence of Magnolia Biondii Pamp Volotile Oil Nanometer Bangosome on Nasal Membrane and Ciliary LU Wei-wei， WU Min， Xi Zheng-jun， et alXinhua Hospital， Medical College of Shanghai Jiaotong University， Shanghai 200092， ChinaAbstract：Objective To investigate the toxicity of nasal membreane and ciliary of the Magnolia biondii Pamp volotile oil nanometer bangosome. Methods Toad palate and rat nasal membrane were used as experimental material， physiological saline and hydrochloride ephedrine as negative control. The Magnolia biondii Pamp volotile oil nanometer bangosome on ciliary movement were carried out using in vitro and electron microscope technique. Results The Magnolia biondii Pamp volotile oil nanometer bangosome had little cilitoxicity to toad palate and rat nasal membrane. Conclusion The Magnolia biondii Pamp volotile oil nanometer bangosome had little cilitoxicity to membrane.Key words：nanometer bangosome；Magnolia biondii Pamp；nasal membrane；toad palate；allergic rhinitis過敏性鼻炎是臨床常見病，以鼻癢、噴嚏、鼻分泌亢進、鼻黏膜腫脹為主要特點，常伴發哮喘、鼻竇炎和分泌性中耳炎等上、下氣道疾病，影響患者生活質量，增加經濟負擔。滴鼻劑、噴霧劑在治療中起著重要的作用，但有些藥物在鼻腔局部給藥后，會影響鼻腔黏膜纖毛系統的功能[1]。辛夷具有散風寒、通鼻竅之功，主要有效成分是揮發油。本課題組在前期研究中采用納米技術成功的制備了包含辛夷揮發油的納米脂質體，通過動物實驗證實納米辛夷揮發油脂質體有抗炎、抗過敏作用。本實驗進一步探討其對蛙口腔黏膜纖毛活動的影響及對大鼠鼻黏膜毒性作用。現報道如下。

1 實驗材料

1.1 動物及分組蛙48只，體重30～40 g，雌雄不拘，上海交通大學醫學院附屬新華醫院動物中心提供，使用許可證號：SYXK(滬)2003-0031。隨機分為6組(每組8只)：氯化鈉溶液組、1%鹽酸麻黃堿組、辛夷揮發油(相當于原藥材55.6 g/mL)組、大劑量納米辛夷揮發油脂質體(5.01 mg/mL)組、小劑量納米辛夷揮發油脂質體(2.505 mg/mL)組、酮替酚組。清潔級SD大鼠16只，6～8周齡， 250 g左右，雄性，隨機分為對照組、實驗組，每組8只。1.2 儀器和試劑光學顯微鏡(OLYMPUS BX51TF，Japan)，電鏡(飛利浦CM- 120)，眼科剪，止血鉗，注射器，蛙板，生理鹽水，1%鹽酸麻黃堿，辛夷花(上海華清中藥飲片公司，批號2004102802)，納米辛夷揮發油脂質體(自制，5.01 mg/mL)，酮替酚滴鼻液(山東魯杭辰欣藥業有限公司，批號0506271)等。

2 實驗方法

2.1 納米辛夷揮發油脂質體對蛙上腭黏膜纖毛活性的影響[2-3]

將蛙仰臥固定在蛙板上，牽開蛙口，用眼科剪分離并剪下3 mm×3 mm上腭黏膜，用0.9%氯化鈉溶液洗凈表面的血液和粘液，黏膜面向上平鋪于載玻片上，于黏膜表面滴0.2 mL實驗藥液，輕輕蓋上蓋玻片，在室溫下置40倍光學顯微鏡下觀察并記錄從點藥開始至纖毛停止搖動所經過的時間。在此期間要不斷從蓋玻片與載玻片的縫隙中滴加藥液，使纖毛始終浸泡在藥液中，總量不超過0.5 mL。計算各組纖毛自身擺動時間的均值和標準差，并做組間比較。

2.2 納米辛夷揮發油脂質體對大鼠鼻黏膜毒性試驗

滴鼻給藥，每日3次，共15 d。給藥劑量：實驗組用納米辛夷揮發油脂質體(5.01 mg/mL)滴鼻3次，每次0.2 mL；對照組用氯化鈉溶液滴鼻3次，每次0.2 mL。第15天實驗結束，取1 mm3鼻中隔黏膜置于4%戊二醛緩沖液及鋨酸進行固定、脫水、包埋，超薄切片及電子染色后，電鏡觀察。

2.3 觀察指標

2.3.1 蛙上腭黏膜纖毛自身擺動時間 計算各組纖毛自身擺動時間的均值和標準差，并做組間比較。

2.3.2 電鏡觀察大鼠鼻黏膜

取1 mm3鼻中隔黏膜置于4%戊二醛緩沖液及鋨酸中進行固定、脫水、包埋，超薄切片及電子染色后，電鏡觀察。

2.4 統計學方法

采用SPSS11.0統計軟件進行統計分析。對各組均數做組間t檢驗。

3 結果

3.1 納米辛夷揮發油脂質體對蛙上腭黏膜纖毛活性的影響

(見表1)表1 納米辛夷揮發油脂質體對蛙上腭纖毛運動的影響 (略)注：與生理鹽水組比較，＊P<0.05；與1%鹽酸麻黃堿組比較，＃P<0.05；與酮替酚滴鼻液組比較，★P<0.05；與小劑量納米辛夷組比較，◆P<0.05；與辛夷揮發油組比較，■P<0.05。

3.2 納米辛夷揮發油脂質體對大鼠鼻黏膜毒性實驗 納米辛夷揮發油脂質體對大鼠鼻黏膜毒性實驗的結果見圖1。從圖1可以看出，對照組給予生理鹽水15 d后，電鏡下可見纖毛細胞結構良好，胞質內線粒體等結構正常，細胞間連接良好。實驗組給予納米辛夷揮發油脂質體15 d后，電鏡下可見超微結構與對照組基本相似，纖毛內部結構基本正常，細胞間連接結構存在。在上皮區域可見較多散在杯狀細胞，在上皮細胞表面可見排列密集一致的纖毛。

4 討論

辛夷用于鼻炎的治療[4-5]臨床療效確切，其主要成分為揮發油，具有廣泛的藥理活性，治療的靶點較多，它可以通過抗組胺、抗過敏、抗炎和對肥大細胞的保護作用等多個環節發生影響。但由于其易揮發、吸收少、有一定刺激性、藥物作用的靶向性不明了而限制了其在臨床上的推廣應用和療效的發揮。納米脂質體具有高效、低毒、可生物降解、生物膜通透性高的特點[6]，成為中藥納米化最理想的載體材料之一。

本課題組發揮中醫特色，多年來對中藥辛夷做了充分的研究[7-8]，在納米砂仁揮發油脂質體[9]研制的基礎上，進一步研制出了納米辛夷揮發油脂質體，以期達到增強療效、增進穩定性、減少鼻黏膜刺激性等目的。通過動物實驗證實了納米辛夷揮發油脂質體有抗炎、抗過敏作用。本實驗進一步探討其對蛙口腔黏膜纖毛活動的影響及對大鼠鼻黏膜毒性作用。 鼻腔作為藥物的給藥部位日益受到關注，鼻腔給藥后可獲得滿意的生物利用度，但必須注意對鼻纖毛的毒性作用。鼻腔黏膜表面覆蓋著一層柱狀纖毛，正常情況下，纖毛協調一致擺動，可以清除進入鼻腔的異物，起到保護作用。鼻腔給藥后，纖毛運動受到不同程度的影響，從而影響鼻腔正常生理功能。藥物對鼻黏膜的毒性主要表現為對黏膜纖毛的毒性，首先是對纖毛擺動的影響。而纖毛的毒性大小，受藥物本身及其濃度大小、藥物的滲透壓、pH值等很多因素的影響。評價藥物或輔料對鼻黏膜纖毛毒性的方法有在體動物模型試驗法和離體動物模型試驗法，選用動物模型主要有雞胚胎氣管黏膜纖毛、大鼠鼻黏膜纖毛和蛙或蟾蜍上腭黏膜纖毛，均與哺乳動物鼻黏膜纖毛相似。大鼠鼻黏膜和蛙或蟾蜍上腭黏膜模型法材料易得，操作簡便，故應用較廣。

本實驗以生理鹽水和鹽酸麻黃堿為陰性對照，采用蛙上腭黏膜及大鼠鼻黏膜，考察納米辛夷揮發油脂質體對黏膜纖毛毒性。結果顯示，生理鹽水、1%鹽酸麻黃堿、酮替酚及小劑量納米辛夷揮發油脂質體對纖毛擺動的抑制作用低于大劑量納米辛夷揮發油脂質體，但大劑量納米辛夷揮發油脂質體對纖毛擺動的抑制作用明顯低于辛夷揮發油(P<0.05)；電鏡結果顯示，納米辛夷揮發油脂質體對大鼠鼻黏膜的結構無明顯影響。本制劑為中藥揮發油納米制劑，主要成分為臨床上常用辛夷揮發油，由于辛夷揮發油刺激性很大，嚴重影響了臨床應用，本課題組運用納米技術成功制備了納米辛夷揮發油脂質體，解決了這一難題。但是，納米辛夷揮發油脂質體仍具有一定的粘稠度，其滲透壓很難與生理鹽水相等，這可能是對纖毛運動有抑制的主要原因。另外，分離黏膜時不可避免的會破壞粘液層，同時離體黏膜自身的缺血缺氧也是影響纖毛運動的重要原因。

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