作者：潘文，胡海波，崔明超，潘金火，歐陽強

【摘要】 目的 確定鴉膽子油亞納米乳注射液的處方和制備工藝。方法 以精制鴉膽子油為油相，蛋黃卵磷脂和泊洛沙姆188為復合乳化劑，優選了鴉膽子油、乳化劑和穩定劑的用量，并用正交設計優化了制備工藝。結果 最優處方為10%油相，1.2%乳化劑，0.1%穩定劑；最優工藝為水相和油相在70 ℃混合，10 000 r/min高速剪切20 min，在900 bar壓力下高壓均質6次。結論 制得的鴉膽子油亞納米乳注射液物理穩定性良好。

【關鍵詞】 鴉膽子油；亞納米乳；處方研究；制備工藝；穩定性

Abstract：Objective To optimize the prescription and technology of Brucea javanica oil subnanoemulsion injection. Methods Using superfine Brucea javanica oil as oil phase， yolk lecithin and poloxamer 188 as the complex emulsifying agents. The dosage of oil， emulsifier and stabilizer were optimized and the preparation was optimized by orthogonal experiments. Results The optimum precription was 10% oil phase， 1.2% emulsifier and 0.1% stabilizer. The optimum technology was that aqueous phase and oil phase mixed at 70 ℃， sheared 20 min by high speed shearing machine and then passed the ultra-high pressure nano homogenizer 6 times under the pressure of 900 bar. Conclusion The physical stability of Brucea javanica oil subnanoemulsion injection is good. Key words：Brucea javanica oil；subnanoemulsion；prescription；preparation technology；stability

鴉膽子油是苦木科植物鴉膽子的干燥成熟果實用石油醚提取所得的脂肪油，具有抗癌作用，主要用于肺癌、肺癌腦轉移及消化道腫瘤[1]。目前雖有注射用乳劑上市，但因粒徑較大，在貯運及使用過程中易發生破乳分層現象，且較難吸收。而亞納米乳制劑具有粒徑較小、穩定性好等優點，可以充分發揮注射用乳劑的靶向作用，減少靜脈炎和血管栓塞等不良反應的發生，延長藥物使用的有效期。筆者以蛋黃卵磷脂和泊洛沙姆188為復合乳化劑、甘油為等滲調節劑、油酸鈉為穩定劑，將鴉膽子油制備成亞納米乳注射液，以穩定性參數為主要指標考察了其處方及制備工藝，所制得的注射液物理穩定性良好，從而為進一步的研究奠定了基礎。

1 儀器與試藥

HH-6數顯恒溫水浴鍋(常州國華電器有限公司)；LXJ-ⅡB離心機(上海安亭科學儀器廠)；PHS-3C PH計(上海雷磁儀器廠)；JA1003分析天平(上海越平科學儀器有限公司)；Nicomp380/ZLS激光粒度/動電電位分析儀(美國PSS公司)； B25高速剪切機(上海貝而特機電設備科技有限公司)；AH110D高壓勻質機(加拿大ATS工業系統公司)。 精制鴉膽子油(自制)；注射用蛋黃卵磷脂E80(德國Lipoid)；注射用泊洛沙姆188(德國BASF公司)；注射用甘油(德國BASF公司)；注射用水(蘇中藥業集團股份有限公司)。其他試劑和試藥均為分析純。

2 處方研究

2.1 基本處方

在

2.2 乳化劑選擇 采用不同比例的蛋黃卵磷脂和泊洛沙姆188作為乳化劑制備亞納米乳，4 000 r/min離心15 min后觀察外觀，并測定穩定性參數Ke。Ke＝(A0－A)/A0×100%，式中A0、A分別為乳劑離心前后測得的吸收度，Ke值越小，亞納米乳越穩定。結果見表1。表1 不同比例乳化劑對亞納米乳穩定性的影響（略） 從穩定性參數Ke可以看出，處方2、3的穩定性均較好，但考慮到泊洛沙姆188為合成乳化劑，不是體內內源性物質，在能夠保證滅菌穩定性和存放穩定性的前提下，其加入量越少越好，所以選用處方2。

2.3 油相比例選擇

固定處方中其他組分的量，以Ke值為指標，考察不同油相比例對亞納米乳穩定性的影響。結果表明，當油相比例為5%和10%時，制得的亞納米乳都很穩定，但考慮到載藥量和臨床使用的療效，故將油相的比例確定為10%。

2.4 穩定劑油酸鈉用量的考察

固定處方中其他組分的量，以Ke值和Zata電位為指標，考察不同比例的油酸鈉對亞納米乳穩定性的影響。結果表明，油酸鈉的加入對亞納米乳的穩定性起著重要的作用，當加入0.1%的油酸鈉后，Ke值和Zeta電位都顯示其穩定性得到顯著提高。故最終確定處方為：精制鴉膽子油100 mL，蛋黃卵磷脂8 g，泊洛沙姆188 4 g，甘油22.5 g，油酸鈉1 g，加注射用水適量，制成1 000 mL。

3 制劑工藝考察

3.1 基本制備工藝

按處方量稱取蛋黃卵磷脂、泊洛沙姆188與甘油，加適量的注射用水于燒杯中，在適宜溫度下進行混合，轉入高速剪切機10 000 r/min剪切3次，每次2 min，制得水相；稱取處方量的精制鴉膽子油，在適宜溫度下邊攪拌邊將其緩慢滴入水相中，轉用高速剪切機10 000 r/min剪切20 min，制得粗乳，加注射用水定容至1 000 mL，再轉用高壓均質機，采用高壓勻化的方法制成細乳；加油酸鈉1 g，并用NaOH調節pH，充氮氣，加塞，加鋁蓋密封。115 ℃旋轉滅菌30 min，即得成品。

3.2 正交優選 亞納米乳的質量與乳化技術有很大的相關性。為尋求最優制劑工藝，并結合大生產的實際，采用正交設計法考察初乳溫度、均質壓力、均質次數和pH值這4個因素不同水平對亞納米乳粒徑的影響，以0.5 μm以下粒子所占百分數φ和Ke值作為指標。因素水平及試驗結果見表2～表5。表2 L9(34)因素水平表（略）表3 L9(34)試驗設計及結果（略）表4 試驗結果φ值的方差分析（略）注：*差異有統計學意義(下同)表5 試驗結果Ke值的方差分析（略） 由R1值可以看出，各因素對亞納米乳劑粒徑影響大小順序依次為D＞A＞B＞C，即pH值＞初乳溫度＞均質壓力＞均質次數。由以上結果直觀分析，較好的制備工藝為A2B3C3D2，從方差分析來看，A、D差異有統計學意義，其余均無統計學意義。而且從直觀分析來看，均質6次較均質3次粒徑變化較明顯，而均質9次與均質6次粒徑變化很小。由R2值可以看出，各因素對穩定性參數Ke值影響大小順序依次為A＞B＞C＞D，即初乳溫度＞均質壓力＞均質次數＞pH值。由以上結果直觀分析，較好的制備工藝為A2B3C2D3。從方差分析來看，A、B差異有統計學意義，其余均無統計學意義。結合生產實際，決定采用A2B3C2D2作為最終制備工藝，即：初乳溫度70 ℃，均質壓力900 bar，次數6次，pH值7.5。 3.3 驗證試驗 鴉膽子油亞納米乳注射液處方：精制鴉膽子油100 mL，蛋黃卵磷脂8 g，泊洛沙姆188 4 g，甘油22.5 g，油酸鈉1 g，注射用水適量，制成1 000 mL。 制備工藝：按處方量稱取蛋黃卵磷脂、泊洛沙姆188與甘油，加適量注射用水于燒杯中在70 ℃下進行混合，轉入高速剪切機，以10 000 r/min剪切3次，每次2 min，制得水相；稱取處方量的精制鴉膽子油，在70 ℃下邊攪拌邊將其緩慢滴入水相中，轉用高速剪切機以10 000 r/min剪切20 min，制得粗乳，加注射用水定容至1 000 mL，再轉用高壓均質機，均質壓力900 bar，均質6次，勻化制得細乳；加油酸鈉1 g，并用NaOH調節pH 7.5，充氮氣，加塞，加鋁蓋密封，115 ℃旋轉滅菌30 min，即得成品。

按上述方法制得3批樣品，檢測各項指標，結果見表6。表6 驗證試驗結果（略）

4 討論

提高亞納米乳的穩定性是本處方優選的關鍵之一。在本試驗中，當乳化劑為蛋黃卵磷脂∶泊洛沙姆188＝2∶1時，所制得到亞納米乳穩定性最好，其原因可能是形成復合凝聚膜，使得乳化膜強度增大，乳劑不易破乳。

文獻[3]指出，蛋黃卵磷脂在高壓滅菌時會降解產生少量的游離脂肪酸，使得乳劑在滅菌前后pH值有明顯變化，而pH值的變化則會導致Zeta電位迅速降低。綜合以上因素并根據相關要求，將正交試驗中pH值的水平選定在6.5、7.5、8.5。 亞納米乳穩定性評價的指標很多，如粒徑大小、離心分離時間、Zata電位的測定、粘度的測定、電導法及穩定性參數的測定等。穩定性參數Ke的測定對設備要求較低，且可以簡單快速的評價亞納米乳的穩定性，因此，用其篩選處方具有一定的優勢。但穩定性參數Ke也有一定的局限性，測定結果誤差較大，因此，應取多個樣品、多次測量來減少誤差，并盡可能結合其他評價指標作出正確的評價。

采用優化后的處方及制備工藝制得的鴉膽子油亞納米乳注射液，外觀呈乳白色，將其4 000 r/min離心15 min未見分層也無小油滴析出，符合2005年版《中華人民共和國藥典》對注射用乳劑的要求，適合于靜脈注射使用。