作者：馮秀媛 宮怡 王永福 竺紅 張玉蓉

【摘要】 目的：通過觀察抗角蛋白抗體(AKA)滴度與臨床和實驗室指標及手和腕關節X線片分期的關系，研究AKA定量分析在診斷類風濕關節炎（RA）中的臨床意義。方法：研究對象分RA組 、非RA組，采用間接免疫熒光法檢測血清AKA，速率散射比濁法檢測類風濕因子（RF）；對AKA進行定量分析，觀察AKA滴度與臨床和實驗室指標及手和腕關節X線片分期的關系。結果：RA組AKA陽性者AKA滴度分布以1∶10和1∶20為主；從臨床效果進行評價，血清稀釋度1∶10為對RA診斷的最佳陽性界值點，且特異度隨血清稀釋度的增加而增高；AKA陽性RA患者AKA滴度對數值與疾病病程、手和腕關節X線片分期、RF濃度呈正相關。結論：RA患者AKA定量分析結果顯示滴度分布以1∶10和1∶20為主；從臨床效果進行評價，血清稀釋度1∶10為對RA診斷的最佳陽性界值點；血清稀釋度越高，特異度越強。AKA滴度與RA患者的病情嚴重程度和疾病活動度呈正相關。

【關鍵詞】 類風濕關節炎；抗角蛋白抗體；定量分析

Abstract Objective：To study the significance of quantitative analysis of anti-keratin antibody (AKA) in rheumatoid arthritis (RA)by observing the relationship of AKA titer with clinical manifestation，lab findings and different hand and wrist X-ray stage.Methods：AKA was detected by IIF (indirect immunofluorescence) and RF was detected by rate nephelometry in 53 RA patients and 62 other internal disease controls. Quantitative analysis of AKA titer was performed， the relationship of AKA titer with clinical manifestation，lab findings and different hand and wrist X-ray stage was compared. Results：In AKA positive RA patients， AKA titer mainly distributed at the 1∶10 and 1∶20 threshold；Serum dilution 1∶10 is the best positive differential point based on the clinical effects;the diagnostic specificity of AKA improved with the increasing of serum dilution.In AKA positive RA patients， AKA titer was positively correlated with the disease course， hand and wrist X-ray stage and RF level， but had no obvious relation with other factors. Conclusions：AKA quantitative analysis shows AKA titer mainly distributes at the 1∶10 and 1∶20 threshold;Serum dilution 1∶10 is the best positive differential point based on the clinical effects; and the diagnostic specificity of AKA improved with the increasing of serum dilution. AKA titer may be positively correlated with disease severity and activity.

Key words Rheumatoid arthritis; Anti-keratin antibody; Quantitative analysis

類風濕關節炎（rheumatoid arthritis， RA）是一種以慢性進行性關節病變為主的全身性自身免疫病，尋找特異性檢測指標對RA進行早期診斷已成為近年來RA研究的熱點[1]。抗角蛋白抗體(anti-keratin antibody， AKA)是1979年Young等[2]人以Wistar大鼠食管組織為底物，用間接免疫熒光法（indirect immunofluorescence， IIF）檢測患者血清時發現的一種對RA特異的與角質層成分反應的IgG型抗體。本研究旨在探討AKA定量分析對RA診斷及病情評估的應用價值。

1 對象與方法

1.1 研究對象

RA組53例，系2004年7月至2005年1月寧夏醫學院附屬醫院風濕免疫科門診及住院的RA患者，符合1987年美國風濕病協會（ARA）修訂的RA診斷分類標準[1]。其中男性14例，女性39例，男∶女＝1∶2.8；年齡17～80歲，平均49.96歲。非RA組62例，系同期寧夏醫學院附屬醫院內科進行AKA檢測的、以國際診斷標準[1]排除RA的其它疾病住院患者；其中男性13例，女性49例，男∶女＝1∶3.8；年齡17～82歲，平均43.39歲；兩組研究對象年齡、性別具可比性。

1.2 主要儀器

80℃低溫冰箱（日本三洋），熒光顯微鏡（Olympus BX60），Array-360特種蛋白全自動分析儀（美國Beckman），Beckman Coulter LH 750 Analyzer，離心機（北京醫用離心機廠生產LD 4－2）。

1.3 研究方法

IIF法檢測AKA，試劑來源于德國歐蒙醫學實驗診斷有限公司。在AKA定性檢測中出現陽性者，進一步倍比稀釋血清至1∶20、1∶40、1∶80、1∶160、1∶320、1∶640、1∶1280或直至檢測結果為陰性。速率散射比濁法檢測RF，試劑來源于美國Beckman公司。

1.4觀察指標

記錄RA患者的一般情況（年齡、疾病病程）、臨床指標（有無晨僵、有無手關節畸形、握拳程度、疼痛關節數、壓痛關節數、腫脹關節數）和實驗室指標（AKA滴度、RF濃度、CRP、ESR、IgG、IgA、IgM、C3、C4、RBC、Hb、WBC、PLT、NE%），計算疾病活動性評分（Disease Activity Score-28， DAS28）[3]，RA患者攝雙手正位片。非RA組記錄AKA檢測結果。

1.5 統計學處理

所有數據全部錄入計算機，采用SPSS 11.5統計軟件進行統計分析。采用四格表計算抗體的敏感度和特異度；引入受試者工作特征曲線（receiver operating characteristic curve， ROC曲線）判斷AKA檢測的最佳陽性界值點；AKA滴度與各臨床和實驗室指標之間的相互關系采用Spearman相關性分析。所有假設檢驗的檢驗水準定為α＝0.05。

2 結果

血清不同稀釋度定為判斷AKA的陽性界限時AKA檢測結果見表1。表1血清不同稀釋度定為陽性界限時AKA檢測結果（略）

從臨床效果進行評價，對血清不同稀釋度定為判斷AKA的陽性界限時AKA檢測對RA診斷的敏感度和特異度引入ROC曲線，結果顯示血清稀釋度1∶10為AKA檢測對RA診斷的最佳陽性界值點，見圖1。

AKA滴度對數值與病人特征及各檢查、檢測結果的相關性分析見表2。

3 討論

本實驗結果顯示，以不同血清稀釋度作為判斷AKA的陽性界限時，血清稀釋度越高，AKA陽性的例數越少。本研究通過引入ROC曲線，對血清不同稀釋度時AKA檢測對RA診斷的臨床效果進行評價，結果顯示血清稀釋度1∶10為兼顧AKA檢測對RA診斷敏感度和特異度的最佳陽性界值點。表2RA組AKA陽性者AKA滴度對數值與病人特征及各指標相關性分析結果（略）

有實驗表明AKA對RA診斷的特異度與其血清稀釋度有一定關系，1∶10作為陽性界限時特異度為96.5%， 1∶40時達100%，建議AKA檢測時亦應報告滴度大小，以便能夠作出更加肯定的診斷[4]。本實驗結果與之一致，AKA檢測對RA診斷的特異度隨血清稀釋度的增加而增高，以1∶10定為陽性界限時，AKA特異度為96.8%，非RA組有2例AKA陽性，一例診斷為系統性紅斑狼瘡，另一例診斷為多發性肌炎；以1∶20定為陽性界限時，AKA特異度已達100%，提示AKA定量分析有利于疾病的診斷和鑒別診斷。

國外對67例RA患者(40% IgG型AKA陽性)2年的隨訪研究發現AKA陽性患者較陰性患者，無論是在臨床、實驗室、還是X線檢查方面都具有更強的疾病活動過程，并發現抗體的滴度變化與疾病活動相平行，認為檢測IgG型AKA對RA具有診斷和判斷預后的作用[5]。

本實驗通過Spearman相關性分析發現AKA滴度對數值與患者疾病病程、雙手和腕關節X線片分期、RF濃度呈正相關且有統計學意義，與DAS28呈一定程度的正相關，與Hb水平呈一定程度的負相關；與年齡、有無晨僵、有無手關節畸形、握拳程度、疼痛關節數、壓痛關節數、腫脹關節數及CRP、ESR、IgG、IgA、IgM、C3、C4、RBC、WBC、PLT、NE%檢測值水平無明顯關系，提示AKA滴度與RA的病情嚴重程度、疾病活動度以及關節侵蝕程度密切相關。

綜上所述，我們認為從臨床效果進行評價，血清稀釋度1∶10為對RA診斷的最佳陽性界值點；AKA對RA診斷的特異度與其血清稀釋度有一定關系，血清稀釋度越高，特異度越強，對RA患者進行AKA定量分析有助于疾病的診斷和鑒別診斷。AKA滴度水平與RA病情嚴重程度和疾病活動度相關，高滴度的AKA預示著RA的放射學破壞較嚴重，因此，建議在臨床工作中對AKA進行定量分析，有利于RA的早期診斷、鑒別診斷、病情監測和指導治療。