作者：馮秀媛 宮怡 王永福 竺紅 張玉蓉

【摘要】 目的：通過(guò)觀察抗角蛋白抗體(AKA)滴度與臨床和實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)及手和腕關(guān)節(jié)X線片分期的關(guān)系，研究AKA定量分析在診斷類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）中的臨床意義。方法：研究對(duì)象分RA組 、非RA組，采用間接免疫熒光法檢測(cè)血清AKA，速率散射比濁法檢測(cè)類風(fēng)濕因子（RF）；對(duì)AKA進(jìn)行定量分析，觀察AKA滴度與臨床和實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)及手和腕關(guān)節(jié)X線片分期的關(guān)系。結(jié)果：RA組AKA陽(yáng)性者AKA滴度分布以1∶10和1∶20為主；從臨床效果進(jìn)行評(píng)價(jià)，血清稀釋度1∶10為對(duì)RA診斷的最佳陽(yáng)性界值點(diǎn)，且特異度隨血清稀釋度的增加而增高；AKA陽(yáng)性RA患者AKA滴度對(duì)數(shù)值與疾病病程、手和腕關(guān)節(jié)X線片分期、RF濃度呈正相關(guān)。結(jié)論：RA患者AKA定量分析結(jié)果顯示滴度分布以1∶10和1∶20為主；從臨床效果進(jìn)行評(píng)價(jià)，血清稀釋度1∶10為對(duì)RA診斷的最佳陽(yáng)性界值點(diǎn)；血清稀釋度越高，特異度越強(qiáng)。AKA滴度與RA患者的病情嚴(yán)重程度和疾病活動(dòng)度呈正相關(guān)。

【關(guān)鍵詞】 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎；抗角蛋白抗體；定量分析

Abstract Objective：To study the significance of quantitative analysis of anti-keratin antibody (AKA) in rheumatoid arthritis (RA)by observing the relationship of AKA titer with clinical manifestation，lab findings and different hand and wrist X-ray stage.Methods：AKA was detected by IIF (indirect immunofluorescence) and RF was detected by rate nephelometry in 53 RA patients and 62 other internal disease controls. Quantitative analysis of AKA titer was performed， the relationship of AKA titer with clinical manifestation，lab findings and different hand and wrist X-ray stage was compared. Results：In AKA positive RA patients， AKA titer mainly distributed at the 1∶10 and 1∶20 threshold；Serum dilution 1∶10 is the best positive differential point based on the clinical effects;the diagnostic specificity of AKA improved with the increasing of serum dilution.In AKA positive RA patients， AKA titer was positively correlated with the disease course， hand and wrist X-ray stage and RF level， but had no obvious relation with other factors. Conclusions：AKA quantitative analysis shows AKA titer mainly distributes at the 1∶10 and 1∶20 threshold;Serum dilution 1∶10 is the best positive differential point based on the clinical effects; and the diagnostic specificity of AKA improved with the increasing of serum dilution. AKA titer may be positively correlated with disease severity and activity.

Key words Rheumatoid arthritis; Anti-keratin antibody; Quantitative analysis

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis， RA）是一種以慢性進(jìn)行性關(guān)節(jié)病變?yōu)橹鞯娜硇宰陨砻庖卟。瑢ふ姨禺愋詸z測(cè)指標(biāo)對(duì)RA進(jìn)行早期診斷已成為近年來(lái)RA研究的熱點(diǎn)[1]。抗角蛋白抗體(anti-keratin antibody， AKA)是1979年Young等[2]人以Wistar大鼠食管組織為底物，用間接免疫熒光法（indirect immunofluorescence， IIF）檢測(cè)患者血清時(shí)發(fā)現(xiàn)的一種對(duì)RA特異的與角質(zhì)層成分反應(yīng)的IgG型抗體。本研究旨在探討AKA定量分析對(duì)RA診斷及病情評(píng)估的應(yīng)用價(jià)值。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

RA組53例，系2004年7月至2005年1月寧夏醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院風(fēng)濕免疫科門診及住院的RA患者，符合1987年美國(guó)風(fēng)濕病協(xié)會(huì)（ARA）修訂的RA診斷分類標(biāo)準(zhǔn)[1]。其中男性14例，女性39例，男∶女＝1∶2.8；年齡17～80歲，平均49.96歲。非RA組62例，系同期寧夏醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院內(nèi)科進(jìn)行AKA檢測(cè)的、以國(guó)際診斷標(biāo)準(zhǔn)[1]排除RA的其它疾病住院患者；其中男性13例，女性49例，男∶女＝1∶3.8；年齡17～82歲，平均43.39歲；兩組研究對(duì)象年齡、性別具可比性。

1.2 主要儀器

80℃低溫冰箱（日本三洋），熒光顯微鏡（Olympus BX60），Array-360特種蛋白全自動(dòng)分析儀（美國(guó)Beckman），Beckman Coulter LH 750 Analyzer，離心機(jī)（北京醫(yī)用離心機(jī)廠生產(chǎn)LD 4－2）。

1.3 研究方法

IIF法檢測(cè)AKA，試劑來(lái)源于德國(guó)歐蒙醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷有限公司。在AKA定性檢測(cè)中出現(xiàn)陽(yáng)性者，進(jìn)一步倍比稀釋血清至1∶20、1∶40、1∶80、1∶160、1∶320、1∶640、1∶1280或直至檢測(cè)結(jié)果為陰性。速率散射比濁法檢測(cè)RF，試劑來(lái)源于美國(guó)Beckman公司。

1.4觀察指標(biāo)

記錄RA患者的一般情況（年齡、疾病病程）、臨床指標(biāo)（有無(wú)晨僵、有無(wú)手關(guān)節(jié)畸形、握拳程度、疼痛關(guān)節(jié)數(shù)、壓痛關(guān)節(jié)數(shù)、腫脹關(guān)節(jié)數(shù)）和實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)（AKA滴度、RF濃度、CRP、ESR、IgG、IgA、IgM、C3、C4、RBC、Hb、WBC、PLT、NE%），計(jì)算疾病活動(dòng)性評(píng)分（Disease Activity Score-28， DAS28）[3]，RA患者攝雙手正位片。非RA組記錄AKA檢測(cè)結(jié)果。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)全部錄入計(jì)算機(jī)，采用SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。采用四格表計(jì)算抗體的敏感度和特異度；引入受試者工作特征曲線（receiver operating characteristic curve， ROC曲線）判斷AKA檢測(cè)的最佳陽(yáng)性界值點(diǎn)；AKA滴度與各臨床和實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)之間的相互關(guān)系采用Spearman相關(guān)性分析。所有假設(shè)檢驗(yàn)的檢驗(yàn)水準(zhǔn)定為α＝0.05。

2 結(jié)果

血清不同稀釋度定為判斷AKA的陽(yáng)性界限時(shí)AKA檢測(cè)結(jié)果見表1。表1血清不同稀釋度定為陽(yáng)性界限時(shí)AKA檢測(cè)結(jié)果（略）

從臨床效果進(jìn)行評(píng)價(jià)，對(duì)血清不同稀釋度定為判斷AKA的陽(yáng)性界限時(shí)AKA檢測(cè)對(duì)RA診斷的敏感度和特異度引入ROC曲線，結(jié)果顯示血清稀釋度1∶10為AKA檢測(cè)對(duì)RA診斷的最佳陽(yáng)性界值點(diǎn)，見圖1。

AKA滴度對(duì)數(shù)值與病人特征及各檢查、檢測(cè)結(jié)果的相關(guān)性分析見表2。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，以不同血清稀釋度作為判斷AKA的陽(yáng)性界限時(shí)，血清稀釋度越高，AKA陽(yáng)性的例數(shù)越少。本研究通過(guò)引入ROC曲線，對(duì)血清不同稀釋度時(shí)AKA檢測(cè)對(duì)RA診斷的臨床效果進(jìn)行評(píng)價(jià)，結(jié)果顯示血清稀釋度1∶10為兼顧AKA檢測(cè)對(duì)RA診斷敏感度和特異度的最佳陽(yáng)性界值點(diǎn)。表2RA組AKA陽(yáng)性者AKA滴度對(duì)數(shù)值與病人特征及各指標(biāo)相關(guān)性分析結(jié)果（略）

有實(shí)驗(yàn)表明AKA對(duì)RA診斷的特異度與其血清稀釋度有一定關(guān)系，1∶10作為陽(yáng)性界限時(shí)特異度為96.5%， 1∶40時(shí)達(dá)100%，建議AKA檢測(cè)時(shí)亦應(yīng)報(bào)告滴度大小，以便能夠作出更加肯定的診斷[4]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與之一致，AKA檢測(cè)對(duì)RA診斷的特異度隨血清稀釋度的增加而增高，以1∶10定為陽(yáng)性界限時(shí)，AKA特異度為96.8%，非RA組有2例AKA陽(yáng)性，一例診斷為系統(tǒng)性紅斑狼瘡，另一例診斷為多發(fā)性肌炎；以1∶20定為陽(yáng)性界限時(shí)，AKA特異度已達(dá)100%，提示AKA定量分析有利于疾病的診斷和鑒別診斷。

國(guó)外對(duì)67例RA患者(40% IgG型AKA陽(yáng)性)2年的隨訪研究發(fā)現(xiàn)AKA陽(yáng)性患者較陰性患者，無(wú)論是在臨床、實(shí)驗(yàn)室、還是X線檢查方面都具有更強(qiáng)的疾病活動(dòng)過(guò)程，并發(fā)現(xiàn)抗體的滴度變化與疾病活動(dòng)相平行，認(rèn)為檢測(cè)IgG型AKA對(duì)RA具有診斷和判斷預(yù)后的作用[5]。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)Spearman相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)AKA滴度對(duì)數(shù)值與患者疾病病程、雙手和腕關(guān)節(jié)X線片分期、RF濃度呈正相關(guān)且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與DAS28呈一定程度的正相關(guān)，與Hb水平呈一定程度的負(fù)相關(guān)；與年齡、有無(wú)晨僵、有無(wú)手關(guān)節(jié)畸形、握拳程度、疼痛關(guān)節(jié)數(shù)、壓痛關(guān)節(jié)數(shù)、腫脹關(guān)節(jié)數(shù)及CRP、ESR、IgG、IgA、IgM、C3、C4、RBC、WBC、PLT、NE%檢測(cè)值水平無(wú)明顯關(guān)系，提示AKA滴度與RA的病情嚴(yán)重程度、疾病活動(dòng)度以及關(guān)節(jié)侵蝕程度密切相關(guān)。

綜上所述，我們認(rèn)為從臨床效果進(jìn)行評(píng)價(jià)，血清稀釋度1∶10為對(duì)RA診斷的最佳陽(yáng)性界值點(diǎn)；AKA對(duì)RA診斷的特異度與其血清稀釋度有一定關(guān)系，血清稀釋度越高，特異度越強(qiáng)，對(duì)RA患者進(jìn)行AKA定量分析有助于疾病的診斷和鑒別診斷。AKA滴度水平與RA病情嚴(yán)重程度和疾病活動(dòng)度相關(guān)，高滴度的AKA預(yù)示著RA的放射學(xué)破壞較嚴(yán)重，因此，建議在臨床工作中對(duì)AKA進(jìn)行定量分析，有利于RA的早期診斷、鑒別診斷、病情監(jiān)測(cè)和指導(dǎo)治療。