作者：蔡力行 戈早川 賴小輝

【摘要】 目的研究用薄層色譜成像方法測定何首烏中大黃素的含量。方法以正己烷-醋酸乙酯-甲酸（15∶3∶0.3）為展開劑，以硅膠G為固定相展開大黃素標準樣品和何首烏抽提液，用色譜成像系統處理薄層斑點，將斑點信息轉換成譜峰信息進行定量。結果大黃素標準工作曲線在0.2～1.0 μg范圍內呈線性，相關系數r＝0.993。何首烏樣品中大黃素含量為0.184 mg/g，RSD為1.0%，回收率100.9%，RSD為3.3%。結論 薄層色譜成像法可以應用于何首烏藥材的質量管理控制，配合相應的展開系統可以推廣至許多應用領域。

【關鍵詞】 何首烏 大黃素 定量分析 薄層色譜成像

中藥材何首烏為蓼科植物何首烏的干燥塊根，具有解毒、消癰、潤腸通便的功能，可用于治療瘰疬瘡癰、風疹瘙癢、腸燥便秘和高脂血癥。何首烏主要的化學成分為：大黃素（emodin）、大黃酚（chrysophanol）、大黃素甲醚（physcion）、大黃素-1，6-二甲醚(emodin-1，6-dimethylether)、大黃素-8-甲醚(questin)、ω-羥基大黃素(citreorosein)、ω-羥基大黃素-8-甲醚(questinol)、2-乙酰基大黃素(2-acetylemodin)、大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷(emodin-8-O-β-D-glucoside)、大黃素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷(Physcion-8-O-β-D-glucoside)等。其中大黃素是一種羥基蒽醌的衍生物。分子式C15H10O5。橙色針狀晶體，熔點256～257℃；不溶于水，能溶于乙醇，稍溶于乙醚、氯仿、苯。 常用的何首烏及其制劑含量測定方法有：薄層色譜法、高效液相色譜法、紫外-可見分光光度法、高效毛細管電泳法、熒光分光光度法、酶化學發光法和流動注射化學發光法等［1］。吳琳［2］用甲醇、水加乙醇加鹽酸混合液和氯仿水浴回流提取，點于含0.3%CMC-Na硅膠G薄層板，用苯-甲醇-甲酸（3∶0.3∶0.05）展開，掃描波長430 nm，測定何首烏中大黃素含量，加樣回收率96.13%。張玉華等［3］用95%乙醇索氏提取，點于同一硅膠G板，用石油醚∶正己烷∶醋酸乙酯∶甲酸（1∶3∶1.5∶0.1）展開，用甲醇洗脫，加1%醋酸鎂-甲醇液顯色，用分光光度計于波長512 nm處測定吸收值，測定何首烏中大黃素含量。本實驗采用薄層色譜成像法定量分析何首烏中大黃素的含量。現報道如下。

1 儀器與試劑 GOODLOOK-1000型薄層色譜成像系統（上海科哲生化科技有限公司）及SnigIt 8 軟件（TechSmith公司）。KQ-250B型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。硅膠G薄層板（青島海洋化工有限公司）。正己烷，醋酸乙酯，甲醇，甲酸（均為分析純）。大黃素標準對照品（購于中國藥品生物制品檢定所）。中藥材何首烏（購于廣東本草藥業連鎖有限公司學府路分店），藥材經深圳市藥品檢驗所熊英高級工程師鑒定確為制何首烏Polygonum multiflorum Thunb.。

2 方法

2.1 薄層條件薄層板為硅膠G；展開劑為正己烷-醋酸乙酯-甲酸（15∶3∶0.3，V/V/V）。用微量注射器吸取何首烏供試品溶液，在膠硅G薄層（點樣前在烘箱中于110℃活化1 h）的下端1.0 cm的基線上點樣，點間距離為0.8 cm，點樣后自然晾干。取展開劑置于層析缸中，將點樣后的薄層板放入層析缸中內，預先平衡15 min.后再進行上行展開7 cm，將薄層取出，吹干，待測。

2.2 樣品制備

2.2.1 何首烏供試品溶液的配制將何首烏100 g藥材置于烘箱中65℃烘干3 h，再放入干燥器中冷卻。隨機取約80 g用手提式中藥粉碎機粉碎，粉末過200目篩，入無色廣口瓶保存。稱取過篩后的何首烏粉末各25 g，加250 ml甲醇用超聲提取器30 min，蒸發濃縮，再將濃縮液轉移到10 ml容量瓶中，用甲醇定容，得何首烏供試品溶液，10℃以下保存備用。

2.2.2 大黃素對照品溶液的配制精確稱取0.005 0 g的大黃素標準對照品，加入甲醇溶解，置于10 ml容量瓶中定容，配成0.50 mg/ml大黃素標準對照品溶液，放置10℃以下保存備用。

2.2.3 加標溶液的配制在1 ml供試品溶液中加入1 ml 0.50 mg/ml大黃素對照品溶液，得加標溶液。

2.3 薄層斑點的成像及峰面積計算方法用薄層成像系統處理展開后的薄層板，再用Snagit 8軟件抓取色譜峰圖象，保存后打開，利用軟件抓圖時的坐標量取峰高和半峰寬度兩端坐標，峰面積等于峰高乘半峰寬度。

3 結果

3.1 大黃素定量分析的標準曲線分別取大黃素標準對照品溶液0.4，0.8，1.2，1.6和2.0 μl從左到右點于同一薄層板上，展開。用薄層色譜成像系統拍攝展開后的薄層，然后利用薄層色譜成像系統生成色譜峰，見圖1。以峰面積對點樣量作圖，得到大黃素的標準曲線，見圖2。大黃素標準曲線在0.2～1.0 μg范圍內呈線性，相關系數r=0.996。

3.2 何首烏中大黃素的含量測定采用外標兩點法進行薄層色譜定量。分別取大黃素標準溶液0.4 μl，何首烏供試品溶液1.0 μl和大黃素標準溶液1.2 μl從左到右依次點于同一薄層板上，展開。平行展開分離3份，編號分別為A，B和C。用薄層色譜成像系統拍攝展開后的薄層，并處理成相應的色譜峰（見圖3）。由峰面積用外標兩點法計算。結果見表1。

表1 何首烏中大黃素含量測定數據（略）

3.3 加樣回收率分別取大黃素標準溶液0.4 μl。加標供試品溶液1.0 μl，大黃素標準溶液1.2 μl，從左到右依次點于同一薄層板上，展開。平行展開3份，編號分別為A，B，C。用薄層色譜成像系統拍攝展開后的薄層，利用薄層色譜成像系統得到相應的色譜峰，如圖4。由峰面積用外標兩點法計算。結果見表2。

表2 回收率測定數據（略）

圖1 大黃素標準曲線的色譜峰（略）

圖2 大黃素的標準工作曲線（略）

圖3 何首烏中大黃素含量測定的色譜峰（略）

圖4 回收率測定的色譜峰（略）

4 討論 以硅膠G為固定相，以正己烷-醋酸乙酯-甲酸（15∶3∶0.3，V/V/V）為展開劑，分離后的大黃素斑點呈圓形，Rf 值適當。大黃素斑點用薄層色譜成像系統轉換處理成色譜峰，可用于定量分析；大黃素標準曲線在0.2～1.0 μg范圍內呈線性，相關系數0.993；所測樣品何首烏中大黃素含量為0.184 mg/g，RSD為1.0%；方法加樣回收率100.9%，RSD為3.3%。薄層色譜成像法適用于何首烏中大黃素的含量測定，并可推廣至許多應用領域。 在通常的薄層色譜方法中，樣品經分離后要采用薄層掃描儀掃描定量。本實驗的創新之處在于用薄層色譜分離了何首烏樣品后，采用薄層色譜成像系統將分離的斑點轉換處理成色譜峰。經實驗，在一定濃度范圍內色譜峰面積與大黃素點樣量呈良好的線性關系。本實驗建立何首烏中大黃素的薄層色譜成像分析法，該法既無須借助薄層掃描儀又承繼了薄層色譜簡便易行的特點，值得推廣使用。