作者：唐前 羅燕英 黃連冬 陸敏珠 唐玲 史麗穎 馮寶民 王永奇

【摘要】 目的測(cè)定金花茶、毛瓣金花茶、凹脈金花茶、四季金花茶、薄葉金花茶不同植物部位中總皂苷、總多酚（鞣質(zhì)）、總黃酮的含量。方法采用紫外分光光度法。結(jié)果其總皂苷、總多酚（鞣質(zhì)）、總黃酮的含量依次為：①金花茶花蕾醇提物：21.30%、6.56%（0.34%）、21.76%；葉子醇提物：43.24%、3.95%（1.57%）、0.93%；葉子水提物：9.91%、6.69%（1.34%）、5.19%；種子醇提物：13.53%、5.88%（0.83%）、6.85%。②毛瓣金花茶葉子醇提物：43.49%、6.79%（1.65%）、1.54%。③ 凹脈金花茶葉子醇提物：36.29%、13.19%（5.33%）、1.12%；種子醇提物：20.58%、5.29%（0.14%）、0.33%。④四季金花茶葉子醇提物：35.90%、7.01%（0.47%）、0.78%。⑤薄葉金花茶葉子醇提物：30.08%、7.57%（0.19%），0.82%。結(jié)論紫外分光光度法測(cè)定以上3種物質(zhì)簡(jiǎn)便易行，準(zhǔn)確可靠，重復(fù)性和回收率都較理想。

【關(guān)鍵詞】 金花茶組植物 總皂苷 總多酚（鞣質(zhì)） 總黃酮

Abstract:ObjectiveTo determine the chemical constituents of total saponin， total polyphenol (tannin) and total flavonoids in Section Chrysantha Chang. MethodsTheir contents were determined by spectrophotometry.ResultsThe contents of total saponin，total polyphenol ( tannin) and total flavonoids were：①21.30%，6.56%（0.34%），21.76%； 43.24%，3.95%（1.57%），0.93%； 9.91%，6.69%（1.34%），5.19%； 13.53%，5.88%（0.83%），6.85%；②43.49%，6.79%（1.65%），1.54%；③36.29%，13.19%（5.33%），1.12%； 20.58%，5.29%（0.14%），0.33%；④35.90%，7.01%（0.47%），0.78%；⑤30.08%，7.57%（0.19%），0.82% respectively.ConclusionThe method is convenient and reliable to determine the three substances， and the reproducibility and the recovery are fairly good.

Key words:Section Chrysantha Chang; Total saponin; Total polyphenol（tannin）; Total flavonoids

20世紀(jì)60年代初，在我國(guó)廣西首次發(fā)現(xiàn)黃色山茶屬植物——金花茶Camellia chrysantha (Hu)Tuyama，震驚世界。到目前為止，已發(fā)現(xiàn)并命名的黃花山茶屬植物已達(dá)32種5變種，1998年張宏光教授將其歸類為金花茶組。其中除越南與廣西接壤的北部有3種，云南、貴州、四川各有1種外，其余26種、5變種均產(chǎn)于我國(guó)廣西南部和西南部的亞熱帶南緣和熱帶北緣地區(qū)。90%分布于中國(guó)，80%分布于廣西，說(shuō)明中國(guó)是金花茶組植物的特產(chǎn)國(guó)，而廣西是金花茶組的特產(chǎn)區(qū)。

但因?yàn)榻鸹ú杞M植物發(fā)現(xiàn)較晚，加之分類上爭(zhēng)議時(shí)間較長(zhǎng)，所以盡管在園林、花卉界轟動(dòng)較大，亦被國(guó)家列為珍稀保護(hù)植物，但對(duì)它的現(xiàn)代研究甚少。本文以皂苷、多酚、黃酮類成分為指標(biāo)，對(duì)其中產(chǎn)量大、資源較豐富的5種金花茶組植物化學(xué)成分進(jìn)行了分析測(cè)定。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器Unico7200可見(jiàn)分光光度計(jì)(尤尼柯上海儀器有限公司); Laborata 4000 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀( Heidolph 公司) ;BP210S 十萬(wàn)分之一電子天平(Sartorius 公司) ; Jasco v﹣2560紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(JASCO 日本分光株式會(huì)社) 。

1.2 試藥5種金華茶組植物均采集于廣西(由廣西林科院梁盛業(yè)鑒定，標(biāo)本現(xiàn)存于大連大學(xué)藥物研究所）;對(duì)照品由本實(shí)驗(yàn)室提供； 蘆丁(東京化成工業(yè)株式會(huì)社， 純度98 %) ; 齊墩果酸( 中國(guó)藥品生物制品檢定所， 批號(hào):1107092200304 ， 純度98 %以上) ; 沒(méi)食子酸(中國(guó)藥品生物制品檢定所， 批號(hào): 1205632200412 ， 純度99.1 %) ; 所用試劑均為分析純; 實(shí)驗(yàn)用水為蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 總皂苷的含量測(cè)定［1］

2.1.1 對(duì)照品溶液的制備精確稱取干燥至恒重的齊墩果酸對(duì)照品25 mg ， 置50 ml 容量瓶中， 加入甲醇溶解并稀釋至刻度， 搖勻， 得0.5 mg·ml- 1的對(duì)照品溶液， 備用。

2.1.2 供試品溶液的制備精確稱取金花茶組植物提取物的干浸膏A(g)， 置100 ml 容量瓶中加入甲醇， 溶解并稀釋到刻度， 搖勻， 得B(mg·ml- 1)的溶液， 備用。

2.1.3 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇齊墩果酸對(duì)照品溶液和供試品溶液香草醛-冰醋酸-高氯酸顯色后， 在紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)上， 波長(zhǎng)400～800 nm 區(qū)間掃描。均在551 nm 處有最大吸收， 因此選擇551 nm為測(cè)定波長(zhǎng)， 測(cè)得的結(jié)果以齊墩果酸為基準(zhǔn)計(jì)算總皂苷的含量。

2.1.4 線性關(guān)系考察精確吸取齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0，0.05，0.10，0.15，0.20 和0.25 ml 分置于具塞試管中，揮去甲醇， 精密加入5%香草醛-冰醋酸溶液(新鮮配制)0.2 ml， 高氯酸0.8 ml ， 搖勻， 于60 ℃水浴中加熱15 min后， 置冰浴中冷卻。加冰醋酸5 ml， 搖勻， 立即在551 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度A， 同時(shí)以試劑空白作參照。以吸光度A為縱坐標(biāo)， 體積V(ml ) 為橫坐標(biāo)， 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得回歸方程A=2.252V-0.0066（R2=0.999 4）。

2.1.5 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)精確吸取C（ml）的供試品溶液， 置于具塞試管中， 揮去甲醇， 照標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下的方法操作， 平行做5 次實(shí)驗(yàn)， 測(cè)定吸光度A， 代入回歸方程， 計(jì)算總皂苷的含量。A，B，C的數(shù)據(jù)見(jiàn)表1。結(jié)果見(jiàn)表2。表1 金花茶總皂苷的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表2 總皂苷含量測(cè)定結(jié)果%

2.2 多元酚及鞣質(zhì)的含量測(cè)定［2，3］

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備精確稱取干燥至恒重的沒(méi)食子酸對(duì)照品10 mg ， 置100 ml 棕色容量瓶中， 加水溶解并稀釋到刻度， 搖勻， 精密量取25 ml ， 置100 ml 棕色量瓶中，用水稀釋至刻度， 搖勻， 得濃度為0.025 mg·ml- 1 的對(duì)照品溶液， 備用。

2.2.2 供試品溶液的制備精確稱取金花茶組植物提取物的干浸膏 D(g)， 置250 ml 容量瓶中， 加水溶解并稀釋至刻度， 搖勻。過(guò)濾， 棄去初濾液50 ml ， 精密量取100 ml ， 置500 ml 棕色容量瓶中， 用水稀釋至刻度， 搖勻，得 E(mg·ml- 1)的供試品溶液Ⅰ; 精密吸取供試品溶液Ⅰ100 ml ， 加至已盛有2.4 g 干酪素的500 ml 具塞錐形瓶中， 密塞， 置30 ℃水浴中保溫1 h ， 時(shí)時(shí)振搖， 取出，放冷， 搖勻， 濾過(guò)， 棄去初濾液， 續(xù)濾液作為供試品溶液Ⅱ， 備用。

2.2.3 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇沒(méi)食子酸對(duì)照品溶液和供試品溶液經(jīng)磷鉬鎢酸-碳酸鈉顯色后， 在紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)上，波長(zhǎng)400～1 000 nm 區(qū)間掃描。均在754 nm 處有最大吸收，因此選擇754 nm 為測(cè)定波長(zhǎng)， 測(cè)得的結(jié)果以沒(méi)食子酸為基準(zhǔn)計(jì)算總酚和鞣質(zhì)的含量。

2.2.4 線性關(guān)系考察精確吸取沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液0 ，0.5，1.0，1.5，2.0 和2.5 ml 分別置10 ml 棕色容量瓶中， 各加水至5 ml ， 再分別加入磷鉬鎢酸試液1 ml ， 用29% Na2CO3 溶液稀釋至刻度， 搖勻， 以相應(yīng)的試劑為空白， 30 min 后， 在754 nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度A。以吸光度A為縱坐標(biāo)， 體積V(ml) 為橫坐標(biāo)， 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得到回歸方程A=0.353 2V-0.029 2（R2=0.999 1）。

2.2.5 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)精確吸取F（ml）的供試品溶液Ⅰ和Ⅱ，分別置于10 ml 的棕色容量瓶中， 照標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下的方法操作， 同法測(cè)定吸收值， 各平行測(cè)定5 次， 在754 nm 處測(cè)定吸光度A， 代入回歸方程， 計(jì)算總酚和鞣質(zhì)的含量。D，E，F(xiàn)的數(shù)據(jù)見(jiàn)表3。結(jié)果見(jiàn)表4。

2.3 總黃酮的含量測(cè)定［4，5］

2.3.1 方法一對(duì)照品溶液和供試品溶液經(jīng)NaNO2-AlCl3顯色后在紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)上以400 nm為測(cè)定波長(zhǎng)進(jìn)行測(cè)定。

對(duì)照品溶液的制備：精確稱取干燥至恒重的對(duì)照品20 mg，置100 ml容量瓶中，加入甲醇溶解并稀釋到刻度，搖勻，得濃度為0.2 mg/ml的對(duì)照品溶液，備用。

供試品溶液的制備：精確稱取金花茶組植物提取物的干浸膏 G(g)， 置100 ml容量瓶中加入甲醇溶解并稀釋至刻度， 搖勻， 得 H(mg·ml- 1)的溶液， 備用。表3 金花茶總酚和鞣質(zhì)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表4 總酚和鞣質(zhì)含量測(cè)定結(jié)果測(cè)定波長(zhǎng)的選擇：對(duì)照品溶液和供試品溶液NaNO2- AlCl3 顯色后， 在紫外可見(jiàn)分光光度上， 波長(zhǎng)200～600 nm 區(qū)間掃描。均在400 nm 處有最大吸收， 因此選擇400 nm 為測(cè)定波長(zhǎng)。測(cè)得的結(jié)果以對(duì)照品為基準(zhǔn)計(jì)算總黃酮的含量。

線性關(guān)系考察：精密吸取對(duì)照品溶液 0.00，0.30，0.60，0.90，1.20，1.50 ml，各加甲醇至4.0 ml，再分別加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的NaNO2溶液0.3 ml，搖勻，室溫放置6 min，再加10% AlCl3溶液0.3 ml，搖勻，室溫放置10 min，在400 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度A，同時(shí)以試劑空白做參比。以吸光度A為縱坐標(biāo)，濃度C（mg/ml）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得到回歸方程A=15.065C+0.002 6，R2=0.999 9 線性范圍：0.013～0.065 2 mg/ml。

重復(fù)性實(shí)驗(yàn)：精確吸取 I（ml） 的供試品溶液， 置于試管中， 加入甲醇至4.0 ml ， 按照標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下的方法操作， 測(cè)定吸光度， 平行做5次實(shí)驗(yàn)， 代入回歸方程， 計(jì)算總黃酮的含量。G 、H 、I的數(shù)據(jù)見(jiàn)表5。結(jié)果見(jiàn)表6。表5 金花茶總黃酮的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表6 總黃酮含量測(cè)定結(jié)果

2.3.2 方法二蘆丁對(duì)照品溶液和供試品溶液經(jīng)NaNO2-Al(NO3)3-NaOH顯色后，在紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)上，以500 nm為測(cè)定波長(zhǎng)進(jìn)行測(cè)定。

對(duì)照品溶液的制備：精確稱取干燥至恒重的蘆丁對(duì)照品20 mg， 置100 ml 容量瓶中， 加入甲醇溶解并稀釋至刻度， 搖勻， 得濃度為0.2 mg·ml- 1 的對(duì)照品溶液， 備用。

供試品溶液的制備：精確稱取金花茶組植物提取物的干浸膏J(g)， 置100 ml容量瓶中加入甲醇溶解并稀釋至刻度， 搖勻， 得K(mg·ml- 1)的溶液， 備用。

測(cè)定波長(zhǎng)的選擇：蘆丁對(duì)照品溶液和供試品溶液NaNO2-Al(NO3)3-NaOH 顯色后， 在紫外可見(jiàn)分光光度上， 波長(zhǎng)200～600 nm 區(qū)間掃描。均在500 nm 處有最大吸收， 因此選擇500 nm 為測(cè)定波長(zhǎng)。測(cè)得的結(jié)果以蘆丁為基準(zhǔn)計(jì)算總黃酮的含量。

線性關(guān)系考察：精確吸取蘆丁對(duì)照品溶液0，0.3，0.6，0.9，1.2和1.5 ml 分置于試管中， 各加甲醇至2.0 ml ， 再分別加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的NaNO2 溶液0.25，搖勻， 室溫放置5 min再加10% Al(NO3)3 溶液0.25 ml ， 搖勻， 室溫放置5 min ， 再加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4 %的NaOH 2.0 ml ， 搖勻， 室溫放置15 min， 在500 nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度A， 同時(shí)以試劑空白做參比。以吸光度A為縱坐標(biāo)，體積V(ml) 為橫坐標(biāo)， 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得到回歸方程A=0.552 7V-0.010 8（R2=0.999 9）。

重復(fù)性實(shí)驗(yàn)：精確吸取1.0 ml 的供試品溶液， 置于試管中， 加入甲醇至2.0 ml ， 按照標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下的方法操作，測(cè)定吸光度， 平行做5次實(shí)驗(yàn)， 代入回歸方程， 計(jì)算總黃酮的含量。J，K，L的數(shù)據(jù)見(jiàn)表7。結(jié)果見(jiàn)表8。表7 金花茶總黃酮的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表8 總黃酮含量測(cè)定結(jié)果%

3 討論

3.1 總黃酮含量測(cè)定方法的選擇經(jīng)大量的文獻(xiàn)調(diào)研表明，采用可見(jiàn)分光光度法測(cè)定總黃酮的含量是比較成熟的方法，此方法穩(wěn)定性好，準(zhǔn)確度高，且簡(jiǎn)便快捷，易于操作，結(jié)果可靠，故選擇了采用分光光度法測(cè)定金花茶提取物中總黃酮的含量。

3.2 皂苷含量測(cè)定方法的選擇皂苷的分析測(cè)定有多種方法，如沉淀法、溶血指數(shù)法、層析法等，沉淀法測(cè)定往往易帶進(jìn)雜質(zhì)或?qū)е略碥兆冑|(zhì)；層析法一般可以分離出總皂苷，但對(duì)總含量測(cè)定不適，誤差大，成本高，而分光光度法操作簡(jiǎn)便、靈敏，屬于經(jīng)典、成熟的方法，我們選擇了與金花茶皂苷類成分基本母核結(jié)構(gòu)接近的齊墩果酸為對(duì)照品，采用分光光度法測(cè)定其總皂苷的含量。

3.3 鞣質(zhì)測(cè)定方法的選擇鞣質(zhì)的經(jīng)典含量測(cè)定方法有很多種，如重量法、容量法、比色法等。以前最常用的有皮粉法、高錳酸鉀法、絡(luò)合定量法。2005年版以前的《中國(guó)藥典》Ⅰ部［2］鞣質(zhì)含量測(cè)定法一直沿用皮粉法。但是其缺點(diǎn)是耗用樣品多，測(cè)定時(shí)間長(zhǎng)，且沒(méi)有選擇性，測(cè)定結(jié)果偏高，而且皮粉用量很大，而2005年版《中國(guó)藥典》Ⅰ部鞣質(zhì)測(cè)定法，以沒(méi)食子酸為對(duì)照品穩(wěn)定性好，干酪素的吸附作用具有專屬性，其方法操作簡(jiǎn)便，用時(shí)短，且重復(fù)性和回收率都較理想。