【摘要】 目的 建立商品肉豆蔻藥材甲醇提取液的指紋圖譜分析方法，以考察不同地區市售肉豆蔻藥材質量的均一性。方法 采用高效液相色譜法，色譜柱為ZORBAX EclipseXDB-C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)；流動相：甲醇-乙腈-水(25∶35∶40)，流速1 mL/min，柱溫：30 ℃；檢測波長：270 nm。以去氫二異丁香酚為參照物。結果 建立了肉豆蔻藥材的指紋圖譜，共有17個共有峰，指紋圖譜相似度均在0.9以上。結論 不同地區市售的商品肉豆蔻藥材無差異性，該法準確、可靠，為肉豆蔻藥材的質量控制提供了科學依據。

【關鍵詞】 肉豆蔻；去氫二異丁香酚；指紋圖譜；高效液相色譜法

Key words：nutmeg；dehydrodiisoeugenol；fingerprint；HPLC 肉豆蔻為肉豆蔻植物肉豆蔻Myristica fragrans houtt.的干燥種仁[1]。由于受到產地來源、貯存時間不詳、質量控制標準較低等原因影響，因此，肉豆蔻藥材內在質量的穩定、均一、可控研究尤為重要。本試驗采用高效液相色譜法(HPLC)，以不同地區商品肉豆蔻藥材為研究對象，建立其甲醇提取液的指紋圖譜分析方法，該法簡便、靈敏、準確，為肉豆蔻藥材的質量標準研究提供了科學依據。

1 材料

1.1 儀器

Agilent1100高效液相色譜儀(chemistation system工作站)。

1.2 試藥

去氫二異丁香酚對照品[2]，沈陽藥科大學提供，經高效液相色譜法面積歸一化法測定，純度>98.0%；肉豆蔻藥材購于不同地區，經鑒定為肉豆蔻科植物肉豆蔻(Mystica fragrans Houtt.)的干燥種仁，肉豆蔻對照藥材購于中國藥品生物制品檢定所，批號120926-200304。甲醇、乙腈為色譜純，水為重蒸水。

1.3 數據處理軟件

國家藥典委員會中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(2004) A版(中南大學設計)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱為ZORBAX EclipseXDB-C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)；流動相：甲醇-乙腈-水(25∶35∶40)，流速1.0 mL/min；柱溫：30 ℃；檢測波長：270 nm。

2.2 參照物溶液的制備

精密稱取去氫二異丁香酚對照品適量，加甲醇制成每1 mL含去氫二異丁香酚0.10 mg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取肉豆蔻粉末(過40目篩)0.5 g，精密稱定，置具塞三角瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定重量，超聲處理30 min，取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液過0.45 μm濾膜，即得供試品溶液。

2.4 檢測方法

參照[《中華人民共和國藥典》2005年版(一部)附錄ⅥD]試驗，分別精密吸取參照物溶液及供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，記錄70 min的色譜圖，即得。

2.5 精密度試驗

精密吸取同一供試品溶液10 μL，在所建立的測定條件下連續進樣5次，采用中藥色譜指紋圖譜的相似性計算軟件計算，結果5次進樣的色譜圖其相似度均為0.9以上，表明儀器精密度良好，符合指紋圖譜要求。

2.6 重復性試驗

精密稱取同一批樣品各5分，分別按供試品溶液制備方法，精密吸取各供試品溶液10 μL，分別注入液相色譜儀，測定指紋圖譜。采用中藥色譜指紋圖譜的相似性計算軟件對5次測定結果進行計算，結果各供試品色譜圖其相似度均為0.9以上，表明方法的重復性良好，符合指紋圖譜要求。

2.7 穩定性試驗

精密吸取同一供試品溶液5 μL，按0、2、4、6、8、12、24 h所建立的測定條件進行檢測，采用中藥色譜指紋圖譜的相似性計算軟件對所得結果進行計算，其相似度均為0.9以上，結果表明，在24 h內肉豆蔻的色譜指紋圖譜基本穩定，沒有明顯的變化，符合指紋圖譜的要求。

2.8 樣品測定

按上述樣品溶液的制備方法及測定方法，對10批不同地區商品肉豆蔻藥材進行測定，記錄色譜圖，采用中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統，對測定結果進行處理，得到各批次樣品的相似度。結果見表1。表1 10批商品肉豆蔻藥材指紋圖譜的相似度（略）

2.9 指紋圖譜的建立及分析(見圖1～圖4)

按上述方法檢測10批肉豆蔻的指紋圖譜，結果表明，10批肉豆蔻藥材的指紋圖譜有17個比較穩定的特征峰，其中4號峰為去氫二異丁香酚色譜峰。由相似度評價結果可以看出，10批不同地區商品肉豆蔻藥材HPLC指紋圖譜的相似度均在0.9以上，未發現離群樣本。表明各藥材之間相似性良好，初步說明目前各地區市售的商品肉豆蔻藥材無差異性，質量較為穩定。

3 討論

試驗中對流動相進行了考察，分別采用甲醇-水(70∶30)、甲醇-乙腈-水(30∶30∶40)、甲醇-乙腈-水(25∶35∶40)為流動相，結果發現以甲醇-乙腈-水(25∶35∶40)為流動相條件下，分離度好，特征峰全面；方法學考察試驗結果證明，該方法準確、可靠，可用于肉豆蔻藥材指紋圖譜的分析測定[3]。 供試品溶液制備時，曾對提取方法(回流、索氏提取、超聲)、提取時間、提取溶劑(甲醇、乙醇、70%乙醇)進行了考察，結果采用甲醇超聲處理30 min即可提取完全，方法簡便、可行，且甲醇對肉豆蔻中揮發性及非揮發性成分均能提取，色譜峰較多。

去氫二異丁香酚是肉豆蔻中非揮發性成分，含量較高，具有較強的抑菌作用，為肉豆蔻中的活性成分，且性質穩定，故選擇其為參照物峰，同時結合其吸收波長及色譜峰數量、分離程度，經篩選確定測定波長為270 nm。 肉豆蔻主要含有揮發油、脂肪油、木脂素類等多種有效成分，本試驗采用HPLC法對其進行指紋圖譜的初步研究。指紋峰不僅包含非揮發性成分，還能包含揮發性成分，化學成分檢測的較多，相比采用氣相色譜法，更能代表肉豆蔻化學成分的整體性。肉豆蔻藥材多為進口，其產地、貯存時間等不太明確，在指紋圖譜研究中發現雖然相似性均在0.9以上，但10批商品肉豆蔻藥材共有指紋蜂相對峰面積變化變異較大，同時也反映不同地區商品肉豆蔻化學成分及本身個體種仁間也可能存在差異，還需進一步研究。