【摘要】 目的 探討川芎藥材的鑒別方法，完善川芎藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法 用薄層色譜法鑒別川芎藥材；以高效液相色譜法測(cè)定阿魏酸的含量。選用Agilent Eclipse XDB-C18柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)，流動(dòng)相為甲醇-1%冰醋酸溶液(21∶79)，流速為1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為320 nm。結(jié)果 薄層色譜中斑點(diǎn)清晰，易于識(shí)別。高效液相色譜法精密度、重現(xiàn)性良好；阿魏酸在0.042 5～0.382 5 μg范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系，平均回收率為97.10%(RSD＝1.31%)。結(jié)論 本法可有效控制川芎藥材的質(zhì)量。

【關(guān)鍵詞】 川芎；薄層色譜法；高效液相色譜法；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

Abstract：Objective To improve the quality standard for Chuanxiong by studing the method of discriminating Chuanxiong. Methods Chuanxiong was identified by TLC. The content of ferulic acid in Chuanxiong was determine by HPLC. The Agilent Eclipse XDB-C18 (4.6 mm×150 mm， 5 μm) was used， mobile phase was methanol-1% acetic acid solution (21∶79)， flow rate was 1.0 mL/min， detection wavelength was 320 nm. Results The TLC spots developed were fairly and simply identical. HPLC was accurate and reproducible. Ferulic acid showed a good liner relationship at range of 0.042 5～0.382 5 μg， the average recovery was 97.10% (RSD＝1.31%). Conclusion These methods can be used to control the quality of Chuanxiong effectively. Key words：Chuanxiong；TLC；HPLC；quality standard 川芎為常用中藥，用于治療月經(jīng)不調(diào)、經(jīng)閉痛經(jīng)、胸脅刺痛、風(fēng)濕痹痛等。《中華人民共和國(guó)藥典》先后采用性狀、顯微、薄層色譜鑒別來(lái)控制川芎藥材的質(zhì)量。為了使川芎藥材質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)更科學(xué)、嚴(yán)謹(jǐn)和更適應(yīng)現(xiàn)代檢驗(yàn)技術(shù)，筆者對(duì)原標(biāo)準(zhǔn)試作了一些相應(yīng)改進(jìn)，完善川芎藥材的薄層色譜鑒別方法，同時(shí)采用高效液相色譜法測(cè)定川芎中阿魏酸的含量，方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，從而完善和提高了川芎藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent1100系列高效液相色譜儀，CQX25-06超聲波清洗器(上海必能信超聲有限公司)。

1.2 試藥 川芎藥材由廣西玉林制藥有限責(zé)任公司提供，收集自四川、湖南、廣西地區(qū)，經(jīng)廣西中醫(yī)學(xué)院林安平教授鑒定為L(zhǎng)igusticum chuanxiong Hort.；阿魏酸對(duì)照品(供含量測(cè)定用，批號(hào)0773-9910)、阿魏酸對(duì)照品(供鑒別用，批號(hào)0773-9001)、川芎對(duì)照藥材(批號(hào)060102)均由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 薄層色譜鑒別 取本品粉末1 g，加乙醚20 mL，超聲提取20 min，濾過(guò)，揮干，殘?jiān)右掖? mL使溶解，作為供試品溶液[1]。另取川芎對(duì)照藥材1 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法[2005年版《中華人民共和國(guó)藥典》(一部)附錄ⅥB]試驗(yàn)，吸取上述2種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯(7∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上顯相同的藍(lán)色熒光斑點(diǎn)。

3 阿魏酸的含量測(cè)定

3.1 色譜條件[2] Agilent Eclipse XDB-C18柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)；流動(dòng)相：甲醇-1%冰醋酸溶液(21∶79)；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：320 nm；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。理論塔板數(shù)按阿魏酸計(jì)算應(yīng)不低于3 500。

3.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取阿魏酸對(duì)照品適量，加甲醇溶解制成每1 mL含0.042 5 mg的對(duì)照品貯備液。再精密吸取該貯備液3.0 mL，置于5 mL棕色容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。

3.3 供試品溶液的制備 取本品適量，研細(xì)，稱取約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入70%甲醇25 mL，密塞，精密稱定，加熱回流30 min，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，靜置，取上清液，用微孔濾膜濾過(guò)，作為供試品溶液。

3.4 對(duì)照試驗(yàn) 按照上述色譜條件，吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液各10 μL，分別注入色譜儀，進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，有相同保留時(shí)間的色譜峰(見圖1)。因此，可在此系統(tǒng)條件下對(duì)阿魏酸進(jìn)行定量分析。

3.5 線性關(guān)系考察 精密吸取阿魏酸對(duì)照品貯備液(0.042 5 mg/mL)1.0、3.0、5.0、7.0、9.0 mL，分別置于10 mL棕色量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，制成一組濃度梯度溶液，搖勻，分別精密吸取10 μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積。以對(duì)照品進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為：Y＝－16.4X＋4 916.6，r＝0.999 5，表明阿魏酸在0.042 5～0.382 5 μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

3.6 精密度試驗(yàn) 精密吸取同一對(duì)照品溶液，按上述色譜條件進(jìn)行分析，重復(fù)進(jìn)樣6次，結(jié)果峰面積均值為1 243.6，RSD＝0.74%。

3.7 重復(fù)性試驗(yàn) 平行制備川芎藥材(批號(hào)060102)的供試品溶液6份，照“3.1”項(xiàng)下方法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果平均含量為0.65 mg/g，RSD＝1.01%。

3.8 穩(wěn)定性考察 精密吸取供試品溶液10 μL，分別在0、2、4、6 h各進(jìn)樣1次，測(cè)定峰面積，RSD＝1.08%。表明供試品溶液在6 h內(nèi)穩(wěn)定。

3.9 加樣回收率試驗(yàn) 稱取已知含量為0.63 mg/g的川芎藥材0.3 g，精密稱定，分別精密加入阿魏酸對(duì)照品貯備液(0.106 3 mg/mL)1.2、1.2、1.8、1.8、2.3、2.3 mL，照“3.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依法測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。表1 阿魏酸加樣回收率測(cè)定結(jié)果（略）

3.10 樣品測(cè)定

按“3.2”和“3.3”項(xiàng)下方法分別制備對(duì)照品溶液和供試品溶液，按上述色譜條件，精密吸取10 μL，注入色譜儀，測(cè)定，按外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算，結(jié)果見表2。表2 樣品測(cè)定結(jié)果（略）

4 討論 本實(shí)驗(yàn)對(duì)川芎藥材進(jìn)行了薄層色譜鑒別，結(jié)果與對(duì)照藥材、對(duì)照品斑點(diǎn)一致，且無(wú)雜質(zhì)干擾斑點(diǎn)，效果較好。在川芎對(duì)照藥材薄層鑒別中，曾比較《中華人民共和國(guó)藥典》中的提取方法與乙醚直接超聲處理，結(jié)果斑點(diǎn)差別不大，所以選擇了操作簡(jiǎn)單的直接超聲處理。在阿魏酸對(duì)照品薄層鑒別中，比較了甲醇超聲和稀鹽酸超聲后用乙醚萃取，結(jié)果直接用甲醇超聲提取的供試品有斑點(diǎn)干擾。在展開和顯色時(shí)，曾用《中華人民共和國(guó)藥典》[1]的展開和顯色條件，但考慮到二氯甲烷有毒，顯色劑[1%三氯化鐵乙醇溶液-1%鐵氰化鉀溶液(1∶1)的混合溶液]配制繁瑣，而且斑點(diǎn)易發(fā)散，后經(jīng)反復(fù)嘗試，用環(huán)己烷-乙酸乙酯-冰醋酸(3∶1.5∶0.2)展開，噴10%磷鉬酸乙醇液后置氨蒸汽中熏，阿魏酸斑點(diǎn)特征明顯，效果好。 在含量測(cè)定中，供試品提取曾比較用甲醇直接超聲處理、70%甲醇直接超聲處理[1]、酸水提乙醚萃取[3]以及5%Na2CO3先使阿魏酸成鈉鹽，然后用乙醚脫脂，用鹽酸酸化使酸游離，再用乙醚萃取[4]，結(jié)果后兩種方法的雜質(zhì)峰少，但含量較低；用甲醇直接超處時(shí)峰形不對(duì)稱，所以采用簡(jiǎn)單而且易操作的70%甲醇直接超聲處理。在流動(dòng)相選擇時(shí)，曾采用當(dāng)歸原藥材[1]含量測(cè)定項(xiàng)下的乙腈-0.085%磷酸溶液，結(jié)果雜質(zhì)峰多，峰形寬、不對(duì)稱。