作者：時維靜，胡躍進(jìn)，王海俠，譚志靜

【摘要】 目的 以白頭翁皂苷B4作為指標(biāo)，考察不同來源白頭翁的質(zhì)量，為白頭翁的加工和選用提供參考。方法 采用高效液相色譜法，對購自亳州中藥材大市場白頭翁藥材與飲片5個樣品和滁州野生白頭翁進(jìn)行含量測定。結(jié)果 在0.312 5～10 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程Y＝276 350X－12 180，R2＝0.999 6。結(jié)論 不同來源的白頭翁藥材皂苷B4含量差異較大。

【關(guān)鍵詞】 白頭翁；產(chǎn)地；白頭翁皂苷B4；含量測定；高效液相色譜法

Key words：Pulsatilla chinensis；original place pulchinenoside B4；content determination；HPLC 白頭翁為毛茛科植物白頭翁Pulsatilla chinensis(Bge.) Regel的干燥根[1]，為多年生草本植物，具有清熱解毒、涼血止痢、燥濕殺蟲的功效。目前市場上以野生采集品為主，由于產(chǎn) 地不一，加工和飲片的切制方法不同，對有效成分的含量影響較大。本試驗從亳州中藥材大市場不同的攤位購白頭翁藥材3種、飲片2種，采集滁州鳳陽九華山野生白頭翁，計6個樣品。以白頭翁皂苷B4為對照品，采用高效液相色譜法測定其含量，為白頭翁的加工和選用提供參考。

1 材料

美國Waters 1525型高效液相色譜儀，2487 DAD紫外檢測器，Breeze色譜工作站(美國Waters)；TU-1810SPC紫外可見分光光度計(北京普析通用有限公司)；BS21S精密電子天平(德國賽多利斯天平有限公司)。白頭翁皂苷B4，暨南大學(xué)葉文才教授惠贈。乙腈、甲醇為色譜純；水為超純水；其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 白頭翁樣品的采集

市場樣品采集于2006年9月，在亳州中藥材大市場不同的攤位購白頭翁藥材A、B、C 3種及飲片D、E 2種。A產(chǎn)地長春；B產(chǎn)地河南；C產(chǎn)地安徽；D購自亳州京皖飲片廠，產(chǎn)地內(nèi)蒙古；E購于亳州中信飲片廠，產(chǎn)地安徽。

滁州鳳陽九華山白頭翁于2006年8月采集，清水洗凈，拭干，立即置105 ℃干燥箱殺酶5 min，取出，待溫度降至50 ℃，再放入干燥箱中烘干，編號為F。

2.2 白頭翁皂苷B4含量測定

2.2.1 檢測波長的確定

取白頭翁對照品溶液，以甲醇溶液作空白基線，在400～190 nm波長范圍內(nèi)掃描。結(jié)果表明，白頭翁皂苷B4在205 nm波長處有最大吸收，甲醇溶液對樣品的測定無干擾。

2.2.2 色譜條件

固定相：ZORBAX SB-C18柱(4.6 mm×150 mm， 5 μm)；流動相：乙腈-水(28∶72)；體積流量1.0 mL/min；檢測波長205 nm；柱溫：室溫。

2.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

稱取5.0 mg白頭翁皂苷B4置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖均，即得0.5 mg/mL濃度的白頭翁皂苷B4溶液，取5 mL置10 mL容量瓶中，甲醇定容至刻度得0.25 mg/mL，依次類推，進(jìn)行倍比稀釋得0.125、0.625、0.031 2、0.015 6 mg/mL 6個梯度濃度的對照品溶液，進(jìn)樣量20 μL。以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y＝276 350X－12 180，R2＝0.999 6。白頭翁皂苷B4在0.312 5～10 μg范圍線性關(guān)系良好。

2.2.4 供試品溶液的制備 精密稱定各樣品白頭翁粗粉20.0 g，置圓底燒瓶中，加95%乙醇溶液100 mL回流提取2 h，提取3次，過濾，靜置12 h。回收乙醇濃縮至20 mL，取1 mL放入100 mL的容量瓶中，加甲醇定容至刻度，即每毫升溶液相當(dāng)于0.01原藥材。于0.45 μm微孔濾膜濾過，作為供試品溶液。

2.2.5 系統(tǒng)適用性考察

在上述色譜條件下，分別吸取對照品溶液和供試品溶液各20 μL，注入液相色譜儀，測定。結(jié)果表明，供試品中白頭翁皂苷B4與其相鄰峰的分離好，保留時間適中(近8 min)。結(jié)果見圖1。

2.2.6 精密度試驗

精密吸取對照品溶液20 μL，注入液相色譜儀中，平行測定5次，在上述色譜條件下測定，對照品峰面積的RSD＝0.72%。結(jié)果表明精密度良好。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗

精密吸取同一供試品溶液20 μL，注入色譜儀中，在上述色譜條件下，于0、2、4、6、8、12、24 h范圍內(nèi)測定，結(jié)果表明，供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好，供試品白頭翁皂苷B4峰面積RSD＝1.20%。

2.2.8 重復(fù)性試驗

取滁州鳳陽白頭翁100 g，粉碎、混勻。分為5份(各20 g)，照供試品溶液制備項下操作，制成供試品溶液，在上述色譜條件下測其白頭翁皂苷B4的峰面積，RSD＝0.80%，表明重復(fù)性良好。

2.2.9 回收率試驗

精密稱取已知皂苷B4含量的樣品0.50 g，分別加入皂苷B4對照品適量，依供試品溶液的制備方法處理成5份，按上述色譜條件進(jìn)樣分析。回收率(n＝5)為99.5%，RSD＝1.10%。

2.3 不同來源白頭翁皂苷B4含量比較

(見表1)表1 不同來源白頭翁皂苷B4含量測定結(jié)果（略）

3 討論 地理環(huán)境和氣候條件是有效成分積累的基礎(chǔ)[2]，所以，來源于不同地區(qū)的白頭翁藥材，白頭翁皂苷B4含量有一定的差異。樣品C、E、F產(chǎn)地均為安徽，為什么含量相差如此之大？經(jīng)我們多年研究表明，一是白頭翁為多年生草本植物，不同的采收時間對其含量有影響；二是白頭翁在干燥過程中存在酶解現(xiàn)象，所以殺酶后再50 ℃干燥，其含量較高；三是白頭翁皂苷為水溶性物質(zhì)，飲片切制過程中潤洗不當(dāng)可導(dǎo)致其喪失，故飲片中其含量較低。

中藥材和飲片是中藥質(zhì)量源頭，其真?zhèn)蝺?yōu)劣直接影響到中成藥的質(zhì)量，也關(guān)系到中醫(yī)臨床療效和患者的用藥安全[3]。有效成分的含量與產(chǎn)地、采收時間及加工方法密切相關(guān)。本試驗采用高效液相色譜法，通過比較不同來源白頭翁其皂苷B4的含量，為白頭翁藥材的選用與加工提供了科學(xué)數(shù)據(jù)。

【參考文獻(xiàn)】 1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005.68. [2] 盛明智.中藥飲片質(zhì)量應(yīng)從產(chǎn)地抓起[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2006，22(19)：3003－3004. [3] 易東陽，胡玉彬.中藥行業(yè)應(yīng)加強產(chǎn)地加工的研究與教育[J].衛(wèi)生職業(yè)教育，2004，22(2)：22－23.